膀胱癌高表達基因UPK3A的篩選、鑑定和相關研究

《膀胱癌高表達基因UPK3A的篩選、鑑定和相關研究》是依託北京大學，由來永慶擔任負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：膀胱癌高表達基因UPK3A的篩選、鑑定和相關研究
• 項目負責人：來永慶
• 依託單位：北京大學
• 項目類別：青年科學基金項目

項目摘要

膀胱癌是我國泌尿系統最常見的惡性腫瘤。研究膀胱癌癌基因功能、轉錄調控機制，確定可用於膀胱癌早期診斷、術後監測的標誌物具有重要意義，其共同前提是確定膀胱癌高表達基因。我們前期通過生物信息學在人全基因組範圍篩選，並通過實驗驗證，確定一個膀胱癌高表達基因UPK3A。研究發現：UPK3A早期診斷膀胱癌優於目前臨床套用的NMP22和尿細胞學。UPK3A的高表達是否促進了膀胱癌的發生、發展？高表達的UPK3A是通過影響哪些基因或蛋白促進膀胱癌的發生、發展？UPK3A在膀胱癌中表達升高的分子機理是什麼？這些都是非常重要的科學問題。我們計畫從UPK3A初步功能研究、與其它蛋白相互作用、轉錄調控機制方面進行研究，確定其功能，並明確其作用機制。這些研究不僅為揭示膀胱癌發生、發展的分子機制提供了理論依據，而且也為膀胱癌的治療提供了一個新的靶點。同時我們將對其進行膀胱癌術後監測的研究,從而確定其術後監測的價值。

結題摘要

本項目研究均按照計畫進行。構建穩定轉染UPK3A正義表達質粒的膀胱癌BIU-87細胞株和穩定轉染四環素可控性RNAi質粒的膀胱癌BIU-87細胞株後，我們通過Wound scratch assay、MTT和流式細胞術評價過表達UPK3A和下調UPK3A表達對BIU-87細胞遷移、增殖和凋亡的影響，結果發現：過表達UPK3A能明顯促進BIU-87細胞遷移、增殖並降低凋亡，而下調UPK3A表達能顯著降低BIU-87細胞的遷移、增殖並促進凋亡。為了研究UPK3A啟動子的基本功能，我們通過將長度為2Kb左右的UPK3A啟動子區域（從-2015到+69, 以啟動子上的翻譯起始位點ATG處為＋1）克隆到螢光素酶報告基因載體 pGL3-basic vector中構成重組質粒pGL3-UPK3A，對pGL3-UPK3A的5’端進行了長度不同的缺失，然後將不同大小的缺失體轉染BIU-87細胞。同時共轉染pRL-CMV以校正轉染效率。36小時後測量這些細胞的螢光強度。通過一系列實驗確定IGFBP-3啟動子區域的-305至+59處的區域中含有能使UPK3A在膀胱癌細胞中表達增高的相關調控序列。構建好夾心法ELISA檢測系統，並收集60例正常志願者、80例良性泌尿外科疾病患者和180例膀胱癌患者的晨尿，通過夾心法ELISA檢測尿液中UPK3A蛋白的水平。結果所示, 膀胱癌患者尿液UPK3A水平明顯高於正常志願者和良性泌尿外科疾病患者，其差異具有顯著的統計學意義(P＜0.01)。方差分析檢測表明，膀胱癌患者平均尿UPK3A水平與正常人或良性泌尿系疾病組的差異具有明顯差異（P＜0.01）。UPK3A的ROC曲線顯示了一個0.896的良好曲線下面積。其敏感性分別為84%和特異性82%。