腺苷酸環化酶

體系

多肽、蛋白質類及兒茶酚胺激素如腎上腺素、胰高血糖素、胰島素、促腎上腺皮質素、促甲狀腺素等都是通過這一信息傳遞而發揮作用的。腺苷酸環化酶廣泛分布於哺乳動物的細胞膜中，此酶催化ATP生成cAMP並釋放焦磷酸。

激素和相應的膜受體結合後，經G蛋白的中介激活腺苷酸環化酶。激素受體嵌在細胞膜的脂雙層內，它與激素結合的部位面向細胞外側。腺苷酸環化酶也居質膜中，位於細胞內側。

G蛋白位於細胞質膜胞漿面的一種外周蛋白，由3個亞基Gα、Gβ及Gγ，由於α亞基結構和作用不同，可分為激動型G蛋白和抑制型G蛋白兩類。

激動型 G蛋白（Gs）未被激活前，Gα蛋白與GDP結合，呈無活性狀態，一旦受體與激素結合後，即可誘發G蛋白上的Gα-GDP 與GTP交換，成為活性狀態的Gα-GTP 。同時，Gα-GTP即與Gβγ部分分離，並移動到鄰近的βγ腺苷酸環化酶部位，以激活腺苷酸環化酶，後者催化ATP變成cAMP。但Gα-GTP的壽命是短暫的，因為Gα本身具有GTP酶的活性，可以水解GTP為GDP與Pi。又成無活性的Gα-GDP，並返回與Gβγ結合成完整的無活性的G蛋白（a-βγ）-GDP。

另有一類G蛋白抑制型G蛋白（Gi），會抑制I,V,和VI亞型的AC的活性例如胰島素、生長素抑制素通過Gi使細胞內cAMP濃度下降。但Gi對II和IV型則有正向刺激作用。

另外，Ca離子跟鈣調蛋白（calmodulin）也可以激活ACI型與III和VIII型。

實驗方法

腺苷酸環化酶的電鏡酶細胞化學試驗方法

腺苷酸環化酶主要分布於細胞質膜、核膜和內質網膜上。它也是一種磷酸酶，能催化ATP形成3'，5'－環磷酸腺苷（cAMP）並釋放出焦磷酸。

Howell等人（1972）首先用亞胺二磷酸腺苷（AMP－PNP）作底物，成功地對動物細胞中的腺苷酸環化酶進行了定位。現已確認，在未固定和固定的組織中，ATP－PNP是腺苷酸環化酶的專一性底物，在腺苷酸環化酶的作用下，能生成cAMP和PNP，後者與捕捉鉛離子反應，生成一種不溶性的電子密度很高的產物。但鉛能在一定程度上抑制酶活性，為克服這一缺點， Fujiomto等（1981）設計了使用二鉀亞碸（DMSO）的硝酸鉛法。下面介紹的是Fujimoto等人使用的DMSO的硝酸鉛法。

固定：配製固定液的緩衝液使用0.1M pH為7.4的二甲胂酸鈉緩衝液，內含8%蔗糖、5%的DMSO。

固定液配方： 2%多聚甲醛和0.25%戊二醛混合液。對於肝臟來說，1%以上的戊二醛固定時，可導致明顯的酶失活。但若加5%的DMSO，酶活性能較好保存。總體來說，多聚甲醛與戊二醛的濃度應因組織而異。一般在0～4℃固定2小時或室溫固定1小時。

洗滌：用配製固定液相同的緩衝液漂洗1小時～過夜，期間更換緩衝液數次；而後進行厚切片；

腺苷酸環化酶

基本介紹

體系

實驗方法

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