《脂肪酸脫飽和酶的表達純化及其功能活性研究》是2019年12月1日中國農業出版社、農村讀物出版社出版的圖書，作者是周浩宇、周海旭、李波。
基本介紹
- 中文名：脂肪酸脫飽和酶的表達純化及其功能活性研究
- 作者：周浩宇、周海旭、李波
- 出版社：中國農業出版社、農村讀物出版社
- ISBN：9787109263437
內容簡介,圖書目錄,
內容簡介
《脂肪酸脫飽和酶的表達純化及其功能活性研究》設計克隆ω3脂肪酸去飽和酶-Δ17去飽和酶（Δ17FAD）基因，研究分析Δ17FAD及去掉跨膜結構的Δ17FAD（NT）基因對表達效率及酶活的影響，探討基因的輔助區結構改變對酶——底物特異性及功能變化的機制。通過甲醇誘導實現在畢赤酵母表達系統中有效表達，純化獲取ω3脂肪酸去飽和酶，為商業化生產新型、高價值的重要脂肪酸提供科學依據，也為研究ω3膜蛋白的高級結構奠定重要基礎。
近年來的研究也表明，部分多不飽和脂肪酸及其代謝產物對內皮細胞有保護作用，這為內皮細胞損傷保護提供了研究方向。而氧化低密度脂蛋白可誘導內皮細胞凋亡並加速動脈粥樣硬化的發生髮展，導致了動脈粥樣硬化後期的斑塊破裂。內皮細胞的損傷及凋亡意味著內皮功能的紊亂，減緩內皮細胞損傷及維持內皮細胞功能正常，增強其對有害因子的抵抗力和耐受性，對動脈粥樣硬化的防治非常關鍵。因此，《脂肪酸脫飽和酶的表達純化及其功能活性研究》通過在血管內皮細胞中過表達低等生物的ω3去飽和酶基因比如Δ17（ω3）脂肪酸去飽和酶基因，將細胞內過多ω6多不飽和脂肪酸或者飽和脂肪酸催化轉化為相應的ω3多不飽和脂肪酸，引導ω6/ω3多不飽和脂肪酸比例的平衡，從而探討脂肪酸脫飽和酶的抗氧化作用及其對損傷細胞的修復作用，為防治心血管疾病如動脈粥樣硬化的發生奠定理論基礎。
圖書目錄
前言
第一章 緒論
第一節 多不飽和脂肪酸的概述
一、多不飽和脂肪酸簡介
二、多不飽和脂肪酸來源
三、多不飽和脂肪酸的生物合成途徑
四、ω3多不飽和脂肪酸功能性
第二節 脂肪酸合成的關鍵酶——脂肪酸去飽和酶的概述
一、脂肪酸去飽和酶分類及結構
二、ω3脂肪酸去飽和酶基因
三、ω3脂肪酸去飽和酶的研究進展
第三節 血管內皮細胞的概述
一、內皮細胞與動脈粥樣硬化
二、血管內皮細胞生理功能
三、血管內皮損傷機制
四、內皮細胞損傷檢測標誌物
五、保護內皮細胞的因素
第二章 Δ17脂肪酸去飽和酶的克隆及表達
第一節 研究材料與方法概論
一、材料
二、實驗方法
第二節 Δ17脂肪酸去飽和酶全長基因及無跨膜結構基因的克隆及表達
一、Δ17FAD基因跨膜結構分析
二、脂肪酸去飽和酶Δ17FAD及Δ17FAD（NT）密碼子最佳化及偏性分析
三、重組載體pPICZαA-Δ17FAD及pPICZαA-Δ17FAD（NT）的構建
四、重組載體pPICZαA-Δ17FAD及pPICZαA-Δ17FAD（NT）的酶切驗證
五、畢赤酵母重組子的PCR鑑定
六、畢赤酵母重組蛋白表達鑑定
第三節 結果與討論
第三章 基因結構改變對脂肪酸脫飽和酶功能活性影響
第一節 研究材料與方法概論
一、材料
二、實驗方法
第二節 Δ17脂肪酸去飽和酶的純化及功能驗證
一、Δ17脂肪酸去飽和酶的純化及質量檢驗
二、Δ17脂肪酸去飽和酶活性驗證
第三節 結果與討論
第四章 穩定表達脂肪酸去飽和酶的細胞株的構建及功能驗證
第一節 研究材料與方法概論
一、材料
二、實驗方法
第二節 穩定表達Δ17脂肪酸去飽和酶的HUVEC細胞株的構建及功能驗證
一、慢病毒重組載體的構建及病毒顆粒滴度檢驗
二、慢病毒轉染HUVEC細胞的螢光鑑定
三、Real-time PCR檢測慢病毒感染效率
四、Δ17FAD表達對HUVEC細胞脂肪酸組成的影響
第三節 結果與討論
一、穩定高表達Δ17FAD的載體的選擇
二、過表達Δ17FAD在HUVEC細胞中功能驗證
第五章 Δ17脂肪酸去飽和酶對HUVEC增殖凋亡及抗氧化應激的影響
第一節 研究材料與方法概論
一、材料
二、實驗方法
第二節 Δ17脂肪酸去飽和酶對內皮細胞增殖凋亡及抗氧化應激的影響
一、Real-time PCR檢測HUVEC細胞中Δ17FAD相對表達量
二、MTT檢測細胞增殖
三、流式細胞儀檢測HUVEC細胞凋亡
四、HUVEC細胞氧化應激指標檢測
第三節 結果與討論
一、Δ17FAD對HUVEC凋亡的影響
二、Δ17FAD對HUVEC抗氧化應激的影響
第六章 Δ17脂肪酸去飽和酶對損傷內皮細胞保護機制的探討
第一節 研究材料與方法概論
一、材料
二、實驗方法
第二節 Δ17脂肪酸去飽和酶對損傷內皮細胞保護機制的探討
一、Δ17FAD對細胞分泌TNF-α、IL-6及ICAM-1水平的影響
二、Δ17FAD對血管舒張因子NO及內皮一氧化氮合酶eNOS的影響
三、Δ17FAD調控細胞凋亡相關蛋白Bcl-2、Caspase-3的表達
第三節 結果與討論
一、Δ17FAD通過調節炎症及黏附因子的表達來修復損傷HUVEC
二、Δ17FAD通過調控ENOS/NO通路修復損傷HUVEC
三、Δ17FAD通過調控凋亡相關蛋白來抑制HUVEC凋亡
參考文獻
