《肝星狀細胞誘導生成調節T細胞在肝纖維化機制中的研究》是依託華中科技大學，由陳倩擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：肝星狀細胞誘導生成調節T細胞在肝纖維化機制中的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：陳倩
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
肝纖維化是慢性肝病發展到肝硬化的必經之路，是我國常見疾病和主要死亡病因之一。近年來, 淋巴細胞及細胞因子介導的免疫學機製成為肝纖維化病研究的熱點。最新的研究表明，在肝纖維化進程中起核心作用的肝星狀細胞（HSC）可直接誘導適應性調節性T細胞（iTreg）的產生，但其在慢性肝病進展中的作用尚不明確。本課題將擬研究iTreg主動參與肝纖維化進程的免疫學機制。將重點闡明肝損傷時，當HSC受血管活性遞質一氧化氮激活後誘導產生iTreg，其分泌的TGF-β等炎症因子能反饋活化HSC、誘導淋巴比例失衡，從而加重肝纖維化進程。申請人將利用增強型綠色螢光蛋白(eGFP)－Foxp3轉染小鼠模型，動態和準確追蹤、並比較在不同病因所致的肝纖維化宿主體內，誘導而生的eGFP陽性iTreg的功能性和差異性。這將為尋找到干預靶點，更有效延緩並阻斷肝纖維化提出一套新的細胞免疫學依據。
結題摘要
項目的背景： 最新的研究表明，在肝纖維化進程中起核心作用的肝星狀細胞（HSC）可直接誘導適應性調節性T細胞（iTreg）的產生，但其在慢性肝病進展中的作用尚不明確。本課題將擬研究iTreg主動參與肝纖維化進程的免疫學機制。目的在於闡明肝損傷時，當HSC受血管活性遞質一氧化氮激活後誘導產生iTreg，其分泌的TGF-β等炎症因子能反饋活化HSC、誘導淋巴比例失衡，從而加重肝纖維化進程。 主要研究內容：利用增強型綠色螢光蛋白(eGFP)－Foxp3轉染小鼠模型，動態和準確追蹤、並比較在不同病因所致的肝纖維化宿主體內，誘導而生的eGFP陽性iTreg的功能性和差異性。研究內容包括三個方面：（1）完善了小鼠纖維化模型，（2）探索肝纖維化機制，（3）探索iTreg在肝纖維化的作用機制。 重要結果、關鍵數據：（1）我們發現四氯化碳（CCl4）誘導肝損傷組裡，部分幼稚T細胞（eGFP－Foxp3－）已轉變為eGFP－Foxp3＋；（2）通過免疫組化法，我們發現幼稚T細胞雖然已轉變為eGFP－Foxp3＋，但於對照組相比，宿主肝纖維化特徵並未有明顯改變；（3）通過用CD45.1、CD45.2等分子標記物由流式細胞儀提取移植到受體內的已轉變為eGFP－Foxp3＋細胞，對新宿主的肝纖維化是有一定保護作用的。（4）通過全基因的甲基化晶片對正常肝臟組織，及肝纖維化組織進行掃描,探索可以作為潛在的肝纖維化診斷的生物標記。 （5）我們發現肝損傷、肝纖維化的組織中具有獨特的全甲基化譜，有成千上萬的顯著高甲基化或低甲基化基因被分析出來。但通過iTreg治療後密切相關基因差異甲基化基因不多。通過對特異基因進行疾病差異顯 著性功能分析、信號通路分析和信號網路分析,我們挑選了12個基因進行進一步篩選。通過臨床樣本中這些基因的表達量和啟動子甲基化驗證,發現 IFITM1、CHST4、TBX15、SMAD6等的啟動子高甲基化，低基因表達量和iTreg的植入密切相關,他們可能作為一個獨立的預測肝臟損失及肝纖維化預後的因素。 科學意義：當前工作從而論證了這種精確的小鼠模型，能準確及動態的探索局部肝組織中iTreg的擴增、HSC的激活與肝纖維化臨床特徵的相關性。新發現異常甲基化基因主要富集的TGF-β、ERK信號通路和細胞增值相關，可能為肝纖維化發生機制相關，以及影響肝纖維化的預後。
