《基於B7-H1/PD-1通路肝星狀細胞調控小鼠肝移植免疫耐受機制》是依託浙江大學，由蔣國平擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：基於B7-H1/PD-1通路肝星狀細胞調控小鼠肝移植免疫耐受機制
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：蔣國平
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
我們前期研究發現，小鼠自發耐受的移植肝臟中CD25+FoxP3+T細胞明顯增多，並伴隨大量浸潤T細胞凋亡，同時發現肝星狀細胞（HpSC）具有體外誘導CD25+FoxP3+T細胞擴增以及使活化T細胞凋亡的功能。因此推測HpSC在肝移植免疫耐受中發揮重要作用。本課題利用小鼠肝移植自發耐受模型，CFSE螢光示蹤分析受體體內T細胞對同種抗原識別、活化增殖能力及效應T細胞成熟狀況；分離純化HpSC，研究其對初始型和活化型T細胞不同的免疫功能；然後，研究HpSC是否通過B7-H1/PD-1通路實現對CD25+FoxP3+T細胞誘導擴增以及對浸潤效應T細胞凋亡誘導的調控；最後，體內經B7-H1抗體阻斷和HpSC過繼輸注等手段分析基於B7-H1/PD-1通路的HpSC免疫調節特性與肝移植自發耐受的相關性，以期發現HpSC新的免疫功能及其分子基礎，進而揭示HpSC等非實質細胞在肝移植免疫耐受中的作用。
結題摘要
本項目以肝星狀細胞（HpSC）為研究對象，調節性T細胞產生和效應性T細胞凋亡為切入點，闡述HpSC和B7-H1分子在小鼠肝移植免疫耐受中的作用。本項目經過三年研究，較好完成了研究內容，達到了預期目的。主要研究結果綜述如下：（1）建立了供體C57BL/6J小鼠至受體C3H小鼠較為穩定的肝移植模型，術後小鼠存活時間可達60天以上。（2）闡明肝移植術後長期存活小鼠體內淋巴細胞抗原識別、活化增殖和效應產生等免疫功能仍然存在：我們將CFSE標記的受體T細胞輸入同種肝移植術後長期存活小鼠體內，發現受體淋巴細胞存在活化增殖現象，同時表達較高水平IFN-γ，而且移植小鼠體內免疫系統對同種抗原存在細胞毒性T細胞殺傷效應。（3）活化的HpSC（aHSC）能誘導產生CD4+CD25+FoxP3+Treg細胞，後者具有非特異免疫抑制功能：aHSC能刺激同種T細胞增殖反應，促使T細胞產生IL-2、IL-5、IL-10等因子，並高表達FoxP3mRNA。流式檢測證明，aHSC能選擇性擴增出CD4+CD25+FoxP3+T細胞（占14.8%，對照組為2.4%），後者能顯著抑制同種抗原和第三方抗原刺激的淋巴細胞增殖反應，表明aHSC選擇性擴增的CD4+CD25+T細胞為Treg細胞。aHSC體內輸注同樣促進小鼠CD4+CD25+FoxP3+ T細胞的擴增。抗體阻斷試驗顯示，aHSC誘導Treg細胞的功能與B7-H1、IL-10、TGF-β等分子無關，而與IL-2有關。（4）aHSC對CD8+T細胞凋亡具有明顯促進作用，並依賴於B7-H1分子：B7-H1阻斷後，HSC對T細胞凋亡的誘導作用明顯減弱。（5）B7-H1介導了小鼠移植肝浸潤T淋巴細胞的凋亡，並影響肝移植小鼠的長期存活時間：小鼠肝移植術後早期移植肝中CD8+T細胞浸潤明顯，隨著存活時間延長，移植肝浸潤的CD8+T細胞明顯減少。將B7-H1基因敲除小鼠進行肝移植，移植肝中浸潤CD8+T細胞的凋亡明顯減少，同時術後存活時間顯著降低。綜合以上結果，我們認為，在多種細胞、多類分子組成的肝移植免疫複雜體系中，HpSC選擇性擴增CD4+CD25+FoxP3+Treg細胞以及促進移植物浸潤CD8+T細胞凋亡的作用，在肝移植免疫耐受形成中發揮重要作用。本項目目前在SCI收錄的期刊上發表相關論文4篇（標註項目編號）。培養博士研究生2名。
