肉與肉製品：維生素A含量測定

《肉與肉製品：維生素A含量測定(GB/T 9695.26-2008)》為GB/T 9695的第26部分。《肉與肉製品：維生素A含量測定(GB/T 9695.26-2008)》代替《肉與肉製品：維生素A含量測定(GB/T 9695.26-1991)》。《肉與肉製品：維生素A含量測定(GB/T 9695.26-2008)》與《肉與肉製品：維生素A含量測定(GB/T 9695.26-1991)》相比主要修改如下：按照GB/T 1.1-2000《標準化工作導則 第1部分：標準的結構和編寫規則》和GB/T 20001.4-2001《標準編寫規則第4部分：化學分析方法》進行了結構調整和文字修改；增加“標準溶液的標定”；增加了“試樣製備”等。

基本介紹

• 中文名：肉與肉製品：維生素A含量測定
• 外文名：Meat and Meat Products-Determination of Vitamin A Content

原理

樣品皂化後，用石油醚提取不皂化的維生素 A，濃縮後，用高效液相色譜螢光檢測器，激發波長340nm，發射波長460nm，分離測定維生素A，用標準外標法計算樣品中維生素A的含量。

試劑

除特別標明外所用試劑全為分析純,所用水應為蒸餾水或同等純度的水。
（1）氫氧化鉀(GB 2306)：50%溶液；
（2）抗壞血酸：10%溶液；
（3）無水乙醇(GB 678)；
（4）石油醚：沸程 30～60℃；
（5）無水硫酸鈉；
（6）異丙醇；
（7）甲醇(GB 683)：重蒸後使用；
（8）維生素A標準溶液：0.2mg/mL

稱取維生素A標準品10.0mg，用異丙醇溶解，移至50mL棕色容量瓶中，用異丙醇稀至刻度。當天配製。

儀器和設備

除實驗室常規設備外，還需要以下設備：
（1）絞肉機：孔徑不超過 4mm；
（2） 旋轉蒸發器；
（3）液相色譜儀，帶螢光檢測器；
（4）色譜柱：十八烷基鍵合固定相柱或其他能分離維生素A的柱子。

試樣

按照如下方法試樣：
（1）按 GB 9695.19 取樣。
（2）取有代表性的試樣200g，於絞肉機中至少絞兩次使其混勻，試樣應儘快分析。

分析步驟

皂化

維生素A易被光破壞，試驗應避光操作。

稱取0.5～5g試樣於150mL棕色皂化瓶中，加入10%抗壞血酸溶液5mL，50%氫氧化鉀溶液15mL，乙醇 30mL，混勻，於80℃水浴上回流加熱30～60min，使試樣溶液清澈，完全皂化後於流水中冷卻。

提取

將皂化後的試樣溶液移入125mL分液漏斗中，用30mL石油醚分數次洗皂化瓶，洗液併入分液漏斗中，塞上塞子，輕搖分液漏斗，避免乳化。靜置，待分層後，將水層放入第二個分液漏斗中，醚層留在第一個分液漏斗中。於第二個分液漏斗中倒入10mL石油醚，進行第二次提取，如此進行3～4次，石油醚層交入第一個分液漏斗中。石油醚層反覆用水洗滌，直至水層不呈鹼性(用pH試紙檢查)為止，棄去水層。將分液漏斗中石油醚層經過無水硫酸鈉脫水，濾入乾燥的棕色圓底燒瓶中。再用石油醚洗滌無水硫酸鈉和分液漏斗，洗液併入棕色圓底燒瓶中

分析試樣的準備

將盛有石油醚提取液的圓底燒瓶與旋轉蒸發器連線，於50～60℃水浴上減壓回收石油醚，待瓶內只剩約1～2mL液體時，取下燒瓶，用氮氣吹乾剩餘液體，立即加入2.0mL異丙醇溶液，搖勻，溶解瓶中維生素A，塞上塞子，以防溶劑揮發，此為色譜分析樣液

測定

（1）維生素A標準曲線的繪製

取維生素A標準溶液 1，2，3，4，5，6，7，8mL進行高效液相色譜(HPLC)分析，記錄峰面積或峰高，以維生素A量為橫坐標，峰高或峰面積為縱坐標繪製標準曲線。

若樣品中維生素A含量很低，可取維生素A標準溶液(0.2mg/mL)5mL，用異丙醇溶液定容至50mL容量瓶中，此標準溶液濃度為0.02mg/mL。如前進行高效液相色譜(HPLC)分析，繪製標準曲線。

（2）色譜分析參考條件

分析柱：十八烷基鍵合固定相柱式相同效用的柱；
流動相：甲醇/水98/2；
流動相流速：1 mL/min；
檢測器：螢光檢測器Ex:340nm；
Em：460nm；
進樣量：試樣液4～6μL，記錄峰面積或峰高。

分析結果的計算

計算公式：X=A×1000×V₀/V₁×m×1000×100

式中：X——樣品中維生素A含量，mg/100g；
A——根據試樣的峰面積或峰高查標準曲線得到維生素A的量，μg；
V₁——試樣進樣分析的體積，μL；
V₀——試樣最終稀釋的體積，mL；
m——稱樣質量，g。
當符合允許差規定的要求時，取兩次測定結果的算術平均值作為結果。

允許差

同一樣品同時或相繼兩次測定結果之差不得超過平均值的 30%。