耐受性樹突狀細胞治療免疫性再生障礙性貧血的研究

《耐受性樹突狀細胞治療免疫性再生障礙性貧血的研究》是依託南昌大學，由陳國安擔任項目負責人的地區科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：耐受性樹突狀細胞治療免疫性再生障礙性貧血的研究
• 項目類別：地區科學基金項目
• 項目負責人：陳國安
• 依託單位：南昌大學

項目摘要

再生障礙性貧血(AA)是較常見血液病,免疫失調是其發病主要機制。研究表明AA患者樹突狀細胞(DC)亞群失衡(DC1/DC2升高)、T調節細胞(Treg)數下降、Th1細胞功能亢進，至今仍被醫學界視為棘手的挑戰。耐受性樹突狀細胞(tDCs)具有刺激Treg生成,維持免疫穩定作用，在移植排斥的預防和自身免疫性疾病的治療研究中已獲得效果。本研究採用VIP、GM-CSF等因子在體外無血清培養或體內誘導小鼠tDCs,並將其用於小鼠免疫性AA模型的免疫治療,觀察tDCs對AA小鼠生存和造血生成的影響,探索tDCs輸注數量與途徑,檢測tDCs體內嵌合及分布,確定tDCs治療前後AA小鼠DCs亞群、T細胞亞群及體內細胞因子變化,測定Treg細胞內FoxP3、IL-2和IFN-γ等基因表達變化,研究tDCs對免疫性AA治療的可行性,建立tDCs治療AA實驗方法,為AA發病機制研究和臨床治療提供理論依據。

結題摘要

本研究取小鼠骨髓細胞，分離單個核細胞。在含GM-CSF、IL-4、VIP、DXM、LPS等因子的RPMI 1640培養基中按不同的組合分為五組進行體外誘導培養，最佳化耐受性樹突狀細胞（tolerogenic dendritic cells，tDCs）體外誘導培養方法，建立了含GM-CSF20ng/ml+VIP40ng/ml+DXM10ng/ml培養基誘導耐受性樹突狀細胞的誘導培養體系。通過小鼠腹腔內注射tDCs和體內示蹤觀察，建立了tDCs誘導特異性免疫耐受的小鼠動物模型，證明骨髓源性tDC能遷移至受體脾、肝臟、淋巴結，並能形成穩定的嵌合，且維持1月以上。通過小鼠尾靜脈輸注tDCs，探索了tDCs治療免疫介導的再生障礙性貧血小鼠的方法。在此基礎上，進一步分離純化tDCs來源的細胞外分泌體（exosome），探索其對免疫介導性再生障礙性貧血模型小鼠造血功能的影響及其在免疫調節中的作用。結果顯示: 採用本體外誘導培養體系培養的tDCs輸入免疫介導性再生障礙性貧血小鼠體內，可誘導CD4+CD25+調節性T細胞生成，初步提示tDCs能促進小鼠造血功能的恢復。小鼠骨髓單個核細胞體外誘導培養生成tDCs，經超速離心純化可獲得exosome（tDex）。tDex與tDCs具有相似的誘導免疫耐受特性，來源於體外培養tDCs的tDex輸注免疫介導性再生障礙性貧血小鼠體內，可誘導CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞生成、Th1/Th2和T-bet/GATA-3基因表達比例下降，促進小鼠造血功能的恢復。本研究為再生障礙性貧血患者提供了一種潛在的免疫治療新途徑。