纖維粘連蛋白EDA片段對腺樣囊性癌侵襲能力的影響

《纖維粘連蛋白EDA片段對腺樣囊性癌侵襲能力的影響》是依託北京大學，由李翠英擔任負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：纖維粘連蛋白EDA片段對腺樣囊性癌侵襲能力的影響
• 項目負責人：李翠英
• 依託單位：北京大學
• 項目類別：面上項目

項目摘要

腺樣囊性癌（ACC）是涎腺常見的上皮性惡性腫瘤，具有極強的侵襲性，治療棘手並嚴重威脅患者生命。惡性腫瘤的侵襲與細胞外基質關係密切，纖維粘連蛋白是細胞外基質的重要成分，其可變剪接片段EDA的表達與多種腫瘤的侵襲性成正相關，並被證明有促進腫瘤細胞運動、增殖的作用。但EDA片段對涎腺ACC侵襲性的影響尚不清楚，而且迄今為止關於EDA的功能研究尚未見其在細胞內功能的表達研究，亦未建立動物模型長期觀測，因此無法證明其在腫瘤侵襲中發揮的真正作用。本研究擬在已成功構建的分泌性和非分泌性真核表達載體基礎上，用分子生物學方法研究EDA片段在ACC細胞內的功能，並建立動物模型較長期觀察EDA與ACC侵襲性之間的關係；敲除EDA外顯子，最終確定EDA在完整纖維粘連蛋白中對涎腺ACC侵襲能力的影響及其信號途徑，尋找阻遏涎腺ACC的靶分子，為探討臨床有效的治療方法提供實驗依據。

結題摘要

已有研究證實，纖維連線蛋白剪下片段EDA（FN+EDA）與多種腫瘤的增殖、侵襲等生物學行為密切相關，本課題組前期研究也已證實FN+EDA在侵襲性極強的涎腺腺樣囊性癌（adenoid cystic carcinoma of salivary glands，SACC）中具有明顯高表達。但是迄今為止，尚未直接觀察到EDA對SACC的影響和機制。本研究在前期已經成功建立EDA片段真核表達載體，為從細胞內探討EDA在ACC細胞侵襲、轉移和增殖等生物學行為方面的作用程度和變化，明確其影響ACC生物學行為的細胞內信號轉導機制，本課題組計畫：採用真核表達載體pcDNA3.1（+）- EDA瞬時轉染SACC細胞後，體外觀察其運動、粘附和增殖變化；通過敲除EDA外顯子，體外觀察EDA-SACC細胞的運動、粘附、增殖等情況;以上述實驗為基礎，比較Ras-MAPK/ERK細胞傳導途徑的P130cas、ERK2及CyclinD1等分子表達的變化情況。 本項目中，以本課題組此前構建的纖維粘連蛋白（Fibronectin, FN）可變剪接片段EDA真核表達質粒為基礎，涎腺腺樣囊性癌細胞SACC-83分別轉染真核表達載體PIRES2-Igk-EDA-EGFP和空載體PIRES2-EGFP，後者作為空白對照，從多個角度檢測了FN-EDA對SACC生物學行為的影響。研究結果明確：高表達EDA的SACC的克隆形成實驗、倍增時間和細胞增殖周期都未呈現高增殖活性；其細胞遷移與侵襲實驗可見具有明顯差異；同質性粘附和EMT標誌物的E-cadherin水平明顯下調，F-actin染色可見其細胞骨架的形態改變明顯。這都證明EDA高表達的SACC提供形成EMT，使細胞的運動能力明顯增強。這些結果首次為我們從細胞內作用途徑了解SACC具有更強侵襲行為的生物學分子機制研究提供了可能，也為今後SACC的進一步生物靶向治療研究奠定了基礎。 自2011年起，本課題組按照上述研究計畫，已經順利完成了課題計畫中體外實驗的全部主要內容，上述已經完成的研究結果目前已經撰寫了英文論文，論文正在投稿中（已投稿Plos ONE），一篇中文論文已投稿給北京口腔醫學雜誌，並被錄用；培養研究生2人，1人已經畢業。部分關於信號通路和體內驗證研究的內容仍在繼續進行，有些數據尚在分析整理中。