等溫滴定量熱法

等溫滴定量熱法

等溫滴定量熱法(Isothermal Titration Calorimetry,簡稱ITC),是一種研究生物熱力學與生物動力學的重要方法,它通過高靈敏度、高自動化的微量量熱儀連續、準確地監測和記錄一個變化過程的量熱曲線,原位、線上和無損傷地同時提供熱力學和動力學信息。

基本介紹

  • 中文名:等溫滴定量熱法
  • 外文名:Isothermal Titration Calorimetry
  • 英文簡稱:ITC
  • 釋義:研究生物熱力學動力學的方法
  • 用途:獲得生物分子完整熱力學參數
  • 套用範圍:10大範圍
實驗研究,用途,套用範圍,

實驗研究

微量熱法具有許多獨特之處。它對被研究體系的溶劑性質、光譜性質和電學性質等沒有任何限制條件,即具有非特異性的獨特優勢,樣品用量小,方法靈敏度和精確度高(本循凶紋儀器最小可檢測熱功率2 nW,最小可檢測熱效應0.125uJ,生物樣臭鑽品最小用量0.4ug,溫度範圍2 ℃ - 80 ℃,滴定池體積1.43 ml)。實驗時間較短(典型的ITC實驗只需30-60分鐘,兵體勸辨並加上幾分鐘的回響時間),想促體操作簡單(整個實驗由計算機控制,使用者只需輸入實驗的參數,如溫度、注射次數、注射量等,頸蘭譽計算機就可以完成整個實驗,再由Origin軟體分析ITC得到的數據)。測量時不需要製成透明清澈的溶液,而且量熱實驗完畢的樣品未遭破壞,還可以進行後續生化分析。儘管微量熱法缺乏特異性但由於生物體系本身具有特異性,因此這種非特異性方法有時可以得到用特異方法得不到的結剃嬸蘭果,這有助於發現新和棵承定現象和新規律,特別適應於研究生物體系中的各種特異過程。

用途

獲得生物分子相互作用的完整熱力學參數,包括結合常數、結合位點數、摩爾結合焓、摩爾結合熵、摩爾恆壓熱容,和動力學參數(如酶活力、酶促反應米氏常數和酶轉換數)。

套用範圍

蛋白質-蛋白質相互作用(包括抗原-抗體相互作用和分子伴侶-底物相互作用);蛋白質摺疊/去摺疊;蛋白質-小分子相互作用以及酶-抑制劑相互作用;酶促反應動力學;藥物-DNA/RNA相互作用;RNA摺疊;蛋白質-核酸相互作用;核酸-小分子相互作用;核酸-核酸相互作用;生物分子-細胞相互作用;……
加樣體積:(實際體積)
cell:1.43 ml,syringe:300 μl
準備樣品體積(最少量)
cell:2 ml,syringe:500 μl

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