β-瓊脂糖酶切割瓊脂糖亞單位或未置換的新瓊脂乙糖(3,6-酐-α-L-吡喃型半乳糖基-1-3-D-半乳糖)生成新瓊脂-寡糖(1)。β-瓊脂糖酶 I 消化瓊脂糖,形成不能再成膠的碳水化合物分子,同時釋放所俘獲的 DNA。通常殘留的碳水化合物分子或 β-瓊脂糖酶 I 不會影響隨後的限制性內切酶消化、連線反應及轉化反應等 DNA 操作。
基本介紹
- 中文名:瓊脂糖酶
- 套用:海藻單細胞的製備等
- 來源:重組E. coli 菌株
- 領域:生物學
類型,來源,反應條件,使用注意,
類型
海洋及其他環境中可以分離出能夠降解瓊脂的瓊脂糖酶.按照作用方式的不同,可將瓊脂糖酶分為α-瓊脂糖酶和β-瓊脂糖酶兩種類型。不同的瓊脂糖酶具有不同的生物學特性。瓊脂糖酶在海藻單細胞的製備、海藻原生質體的製備、瓊脂寡糖的製備、海藻多糖結構的研究及分子生物學研究方面具有重要的套用價值。
來源
重組E. coli 菌株,此菌株的質粒上攜帶有β-瓊脂糖酶I的基因編碼。
反應條件
1X β-瓊脂糖酶I反應緩衝液
[10 mM Bis Tris-HCl (pH 6.5), 1 mM Na2EDTA]。42°C溫育。
使用注意
瓊脂糖:由於在反應溫度42°C條件下,溶液必需要呈液態,所以僅低熔點瓊脂糖適合於用β-瓊脂糖酶I消化。
pH值的敏感性:β-瓊脂糖酶I在pH 6.5時有最適酶活力,在pH 5.0-8.5範圍內可以保持>75%的酶活力。
對鹽的敏感性:NaCl或Na2EDTA濃度在50到500 mM之間不影響β-瓊脂糖酶I活性。