瓊脂糖凝膠型電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質的一種電泳方法。對於分子量較大的樣品,如大分子核酸、病毒等,一般可採用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進行電泳分離。瓊脂糖凝膠具有網路結構,物質分子通過時會受到阻力,大分子物質在涌動時受到的阻力大,因此在凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅取決於淨電荷的性質和數量,而且還取決於分子大小,這就大大提高了分辨能力。
基本介紹
- 中文名:瓊脂糖凝膠型電泳
- 屬性:分子生物學術語
瓊脂糖凝膠型電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質的一種電泳方法。對於分子量較大的樣品,如大分子核酸、病毒等,一般可採用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進行電泳分離。瓊脂糖凝膠具有網路結構,物質分子通過時會受到阻力,大分子物質在涌動時受到的阻力大,因此在凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅取決於淨電荷的性質和數量,而且還取決於分子大小,這就大大提高了分辨能力。
瓊脂糖主要在DNA製備電泳中作為一種固體支持基質,其密度取決於瓊脂糖的濃度。在電場中,在中性pH值下帶負電荷的DNA向陽極遷移,其遷移速率由下列多種因素決定:(1)DNA的分子大小 線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數成反比,分子越大則所受阻力越大,也越難於在凝膠孔隙中蠕行,...
瓊脂糖凝膠電泳 1.原理 瓊脂糖是從海藻中提取出來的一種線狀高聚物。將瓊脂糖在所需緩衝液中加熱熔化成清澈、透明的溶膠,然後倒入膠模中,凝固後將形成一種固體基質,其密度取決於瓊脂糖的濃度。將凝膠置電場中,在中性pH值下帶電荷的核酸通過凝膠網孔向陽極遷移,遷移速率受到核酸的分子大小、構象、瓊脂糖濃度、...
瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質,不帶電荷,而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖,由於這些基團帶有電荷,在電場作用下能產生較強的電滲現象,加之硫酸根可與某些蛋白質作用而影響電泳速度及分離效果。因此,多用瓊脂糖為電泳支持物進行平板電泳,其優點如下。(1)瓊脂糖凝膠電泳操作簡單,電泳速度...
DYCP-31CN型 瓊脂糖水平電泳儀(槽)(小號)適用於核酸電泳。基本參數 外型尺寸(L×W×H):260×116×76mm;凝膠板規格(L×W):100×70mm;50×70mm 試樣格:8、15齒,1.0mm厚;8、15齒,1.5mm厚;重量:1Kg 緩衝液總容量:約260ml;性能特點 高透明度聚碳酸酯注塑成型,無滲漏;專用制膠器,制膠...
常用瓊脂糖作為電泳支持物,分離蛋白質和同工酶。將瓊脂糖電泳與免疫化學相結合,發展成免疫電泳技術,能鑑別其他方法不能鑑別的複雜體系,由於建立了超微量技術,0.1ug蛋白質就可檢出。瓊脂糖凝膠電泳也常用於分離、鑑定核酸,如DNA鑑定,DNA限制性內切核酸酶圖譜製作等。由於這種方法操作方便,設備簡單,需樣品量少...
《澱粉-瓊脂糖凝膠釋放電泳——發現和研究》是2018年科學出版社出版的圖書,作者是秦文斌(Author,Qin,Wenbin)。內容簡介 《澱粉 瓊脂糖凝膠釋放電泳:發現和研究》的主要內容:—是在基礎理論方面,發現紅細胞內各種蛋白質的兩種存在狀態:①紅細胞內HbA2與HbA1結合存在,還有PRX2(過氧化物還原酶2)參與;②紅...
用途:脂蛋白電泳主要用於高脂蛋白血症分型,也有助於了解冠心病的血脂狀態,更好地指導臨床診療工作。:基本原理 脂蛋白是在鹼性pH條件下,以瓊脂糖凝膠或醋酸纖維條帶作為載體,從陽性方向來進行分離的。形成的蛋白區帶可以用脂肪染料如蘇丹黑或者油紅染色,它們只用於脂蛋白染色。在瓊脂中可能會有附加的聚陰離子和...
脈衝場凝膠電泳儀是一種用於預防醫學與公共衛生學、臨床醫學、基礎醫學領域的分析儀器,於2019年4月12日啟用。技術指標 多階段模式,20 小時電泳,120°角度, 60–120 秒轉換時間梯度, 6 V/cm(200 V), 0.5 x TBE, 14°C, 1% Certified 分子生物瓊脂糖 二次脈衝 6 V/cm(200 V),0 角度, 3 秒...
1.按支持物的物理性狀不同,區帶電泳可分為:(1)濾紙為支持物的紙電泳;(2)粉末電泳:如纖維素粉,澱粉,玻璃粉電泳;(3)凝膠電泳:如瓊脂,瓊脂糖,矽膠,澱粉膠,聚丙烯醯胺凝膠電泳;(4)緣線電泳:如尼龍絲,人造絲電泳 2.按支持物的裝置形式不同,區帶電泳可分為:(1)平板式電泳:支持物水平...
簡而言之就是將單個細胞懸浮於瓊脂糖凝膠中,經裂解處理後,再在電場中進行短時間的電泳,並用螢光染料染色,凋亡細胞中形成的DNA降解片段,在電場中泳動速度較快,使細胞核呈現出一種彗星式的圖案,而正常的無DNA斷裂的核在泳動時保持圓球形,這是一種快速簡便的凋亡檢測法。在實驗前準備好樣品,進行DNA損傷的...
電泳過程中釋放出的熱量與電流的平方成正比。當電場強度增大或電極緩衝液中離子強度增高時,電流會隨著增大。如果散熱系統無法滿足需要,電泳體系溫度就會有較大升高。這不僅降低解析度,而且在嚴重時會燒斷濾紙或熔化瓊脂糖凝膠支持物。6.支持介質的篩孔大小 支持介質的篩孔大小取決於支持介質性質和濃度。實驗時需根據...
將處理過的凝膠條放在SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳濃縮膠上,加入丙烯醯胺溶液或熔化的瓊脂糖溶液使其固定並與濃縮膠連線。在第二維電泳過程中,結合SDS的蛋白質從等電聚焦凝膠中進入SDS-聚丙烯醯胺凝膠,在濃縮膠中被濃縮,在分離膠中依據其分子量大小被分離。這樣各個蛋白質根據等電點和分子量的不同而被分離、分布在...
電泳技術是指帶粒子在電場中向與自身帶相反電荷的電極移動的現象。在生命科學領域,常利用電泳技術在惰性支持介質(如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯醯胺凝膠等)中,於電場的作用下,向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動,使組分分離成狹窄的區帶,從而用適宜的檢測方法記錄其電泳區帶圖譜或計算其百分含量的...
其它方面 電泳技術還廣泛套用於食品檢測、環境保護等方面,和人們的生活息息相關。電泳技術的廣泛使用,促使各大專院校和中等專科學校急切培養大批電泳技術人才,以滿足社會需要,所以電泳又成為不可缺少的教學科研手段。實驗室教學常用電泳技術:紙上電泳和醋酸纖維素薄膜電泳、瓊脂及瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯醯胺凝膠電泳。
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質的一種電泳方法。它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。DNA分子在高於等電點的pH溶液中帶負電荷,在電場中向正極移動。由於糖-磷酸骨架在結構上的重複性質,相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的淨電荷,因此它們能以同樣的速率向正極方向移動。遷移速度與核酸分子本身的大小...
在UNIC22100 型紫外分光光度計上測定DNA 純度及估計模板濃度,並用瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA 分子量。擴增 使用PE29600 型PCR 擴增儀,反應總體積為25μl,其中10 ×Buffer,2 mmol/ L Mg,0.12 mmol/ L 引物,0.12 mmol/ L dNTPs,2U Taq 酶,20 ng 模板DNA。PCR 反應程式為95 ℃預變性5 min,94 ℃變性...
(1) DNA的濃度和純度必須經過瓊脂糖凝膠電泳或螢光法測定, 樣品應與已知量DNA一起電泳。(2) 分光光度法對於很多DNA提取物包括質粒小量製備來說,並不能給出一個可信的DNA濃度估計,混雜的染色體DNA、蛋白、RNA、有機物及無機化合物均可能有260 nm光吸收。因此,分光光度法常常錯誤地高估DNA濃度。 (3) ...
酶譜技術是利用電泳技術結合特異的酶促化學反應顯色對同工酶進行分析的方法。根據酶蛋白分子 的大小和所帶電荷量的不同,通過電泳使之 分離,並利用酶的催化活性作用於底物,用 不同方法顯現出酶蛋白的特徵性電泳譜帶 (酶譜)後進行判型。通常採用澱粉凝膠電泳、瓊脂糖凝膠電泳和等電聚焦技術分離同工酶。常用顯...
凝膠電泳分析 影響瓊脂糖凝膠電泳DNA遷移率的因素:①DNA分子大小,DNA分子越大遷移速度越慢。②遷移率與瓊脂糖濃度成反比。③DNA構象:a.相同分子量的超螺旋環狀(Ⅰ型),切口環狀(Ⅱ型),線狀(Ⅲ型)DNA,以不同速率通過凝膠。b.一般情況下,遷移率Ⅰ型>Ⅲ型>Ⅱ型。④電壓:遷移率與所加電壓成正比,...
20. 抽取每種重擴增樣品的5%~10%,用1%(m/V)瓊脂糖凝膠電泳來估計出重擴增DNA片段的含量。21. 若用礦物油覆蓋在微量離心管內樣品液體的上層(步驟18),反應結束後可用150μl氯仿抽提去除。22. 將重擴增DNA片段連入一種帶有dT尾的載體,取部分連線液轉化大腸桿菌宿主菌。23. 從培養平皿上挑取6個或...
(1) 約50μl體積中酶切10pg-10μg的DNA, 然後在瓊脂糖凝膠中電泳12-24小時(包括DNA分子量標準物)。(2) 500ml水中加入25μl 10mg/ml溴化乙錠,將凝膠放置其中染色30分鐘, 然後照相。(3) 依次用下列溶液處理凝膠,並輕微搖動: 500ml 0.2mol/L HCl 10分鐘, 傾去溶液(如果限制性片段>10kb, 酸處理時間為20...
(瓊脂糖凝膠電泳→硝酸纖維素膜吸印)。限制性內切酶常見的有那些?限制性內切酶(restriction endonuclease):一種在特殊核甘酸序列處水解雙鏈DNA的內切酶。Ⅰ型限制性內切酶既能催化宿主DNA的甲基化,又催化非甲基化的DNA的水解;而Ⅱ型限制性內切酶只催化非甲基化的DNA的水解。合成引物的要點,PCR的反應組成:標準...
對凝膠電泳的替代 PCR反應和酶切反應結果的檢驗方法是傳統的瓊脂糖凝膠電泳,但這種方法要結合一些有毒染料(如溴化已錠(EB))進行染色,對試驗人員的安全產生潛在的威脅。HRM技術替代瓊脂糖凝膠電泳是一種很好的選擇,通過熔解曲線可以清楚地鑑別反應產物的特異性和濃度大小等。其優點非常明顯,不必使用凝膠基質和有...
瓊脂糖凝膠電泳可幫助判斷擴增產物的大小,有助於擴增產物的鑑定,點雜交除可鑑定擴增產物外,還有助於產物的分型;Southern雜交分析可從非特異擴增產物中鑑定出特異產物的大小,增加檢測的特異性與敏感性,最近發展的一系列產物分析法(PCR-ELISA,PCR-EIA,PCR-OLA等)均有助於產物的精確分析。凝膠電泳 PCR產物可...
2.血漿蛋白C抗原含量檢測(免疫火箭電泳法)受檢血漿中的PC抗原在含有PC抗血清的瓊脂糖凝膠中電泳,抗原抗體結合形成複合物,在電場作用下形成火箭樣沉澱峰,沉澱峰高度與受檢血漿中PC抗原含量成正比,據此可計算出受檢血漿中PC抗原含量。正常值參考範圍 1.血漿蛋白C 活性檢測 100.24%±13.18%。2.血漿蛋白C抗原...
值得注意的是,由於瓊脂糖凝膠電泳解析度的限制,DNA 指紋圖譜大片段區域的變異性往往很高,而小片段區域的變異性則很低,因此在實際操作時往往將小於 2kb 的小片段跑出膠外或不作統計。(3)簡單而穩定的遺傳性:Jeffreys 等(1985a)通過家系分析表明,DNA 指紋圖譜中的譜帶能夠穩定地從上一代遺傳給下一代。子...
圖1為exendin-4融合蛋白的雙酶切產物的瓊脂糖凝膠電泳結果 圖2為exendin-4融合蛋白的免疫鑑別圖譜 圖3為exendin-4融合蛋白的等電聚焦電泳圖譜 圖4為exendin-4融合蛋白的凝膠色譜圖譜 圖5為體外活性實驗:HEK-293穩定細胞表達人源GLP-1受體cAMP濃度比例試驗 圖6體內活性實驗:ob/ob小鼠肥胖糖尿病模型 圖7體內活性...
MLVA分析方法包括兩套引物,其中panel1由8個位點(重複單元:12-134)組成,為布氏菌種的鑑定指標,其串聯重複序列可變重複數目可通過2%瓊脂糖凝膠電泳判定;panel2也由8個位點(重複單元:6-8)組成,為高變異度指標,其串聯重複序列可變重複數目可通過毛細血管電泳判定。選取了15株羊種菌、22株牛種菌、21株豬種菌和l...
PCR的方法有30餘種,如多重PCR、巢式PCR、二次PCR、共享引物PCR、逆轉錄PCR、錨定PCR等等。現臨床研究最常用的是逆轉錄PCR,現簡介如下:首先提取細胞總RNA,然後在逆轉錄酶的作用下,以mRNA為模板合成cDNA,隨後加入特異性引物進行擴增,再經瓊脂糖電泳檢測特異性的DNA,從而反映出某種基因的轉錄狀況。