《狂犬病病毒粒子的蛋白質組學研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由張岩擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：狂犬病病毒粒子的蛋白質組學研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張岩
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
狂犬病病毒（Rabies virus，RABV）擁有少量遺傳物質，病毒生命周期的完成依賴於宿主細胞的生命維持系統，病毒在細胞內增殖的每一個過程都是病毒與宿主蛋白相互作用、相互調節的結果。研究發現，在病毒的入侵、複製、組裝及出芽階段，許多宿主蛋白參與了這些過程後能夠整合到成熟病毒粒子上。為此，本研究從病毒感染後釋放的病毒粒子入手，首先利用差速離心法和蔗糖梯度離心法純化RABV體內和體外感染後釋放的成熟病毒粒子。然後採用液相色譜與質譜串聯的方法對純化的病毒粒子進行蛋白質組學分析。為了進一步篩選特異性的宿主蛋白，我們將採用免疫金標、免疫印跡和雷射共聚焦技術確定參與病毒生命周期的宿主蛋白、及宿主蛋白在病毒粒子上的定位。最後通過RNA干擾、表達細胞系構建、雷射共聚焦技術、免疫共沉澱及Real-time PCR技術，研究宿主蛋白在RABV生命周期中的作用，本研究對揭示RABV致病機制具有重要科學意義。
結題摘要
狂犬病病毒是一種有囊膜的不分節段的負鏈RNA病毒，主要侵害中樞神經系統，引起人和哺乳動物致命性的腦脊髓炎。現有研究表明囊膜病毒粒子從感染的細胞中出芽釋放時會攜帶許多可能在病毒的複製過程中發揮重要作用的宿主蛋白。儘管先前偶見報導某個宿主蛋白可摻入到狂犬病病毒粒子上，但還沒有系統地鑑定狂犬病病毒粒子上的蛋白質組。本研究採用N2a細胞體外培養狂犬病毒CVS-11株，然後利用碘克砂醇（iodixanol）密度梯度超速離心法純化成熟的狂犬病毒粒子，再採用蛋白質組學方法LC-MS/MS鑑定了成熟的狂犬病病毒粒子上的蛋白質組成。結果表明在純化的病毒粒子上除檢測到狂犬病病毒編碼的五個結構蛋白以外，還檢測到了102個宿主蛋白。GO注釋的蛋白質按生物學過程可分為22類：主要涉及到蛋白質代謝（34%），蛋白質定位（20%），蛋白質運輸（13%），生物合成過程（13%），這說明了病毒在宿主細胞中的合成需要多種宿主蛋白的參與。按細胞定位可將其分成20類：但是絕大多數蛋白是囊泡相關蛋白和細胞黏附接頭蛋白。KEGG分析結果表明參與胞吞機制信號通路的蛋白質較多，且大多數與ESCRT系統有關，這說明囊泡蛋白可能參與了病毒的出芽、釋放。利用免疫印跡和免疫金標記方法對病毒粒子上的11個宿主蛋白進行進一步驗證，結果表明宿主蛋白HSC70，TSG101，ALIX，VPS37，CHMP4B，CHMP2B，CHMP3，VPS4B，HSP40確實整合到病毒粒子上，且定位在病毒囊膜的內部，而CD9，β-Actin定位在病毒囊膜的表面。本研究系統地鑑定狂犬病病毒粒子上的宿主蛋白組成，有助於進一步研究該病毒複製與感染機制。
