《流感病毒NS1蛋白抑制干擾素刺激基因表達及其機制研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由田明堯擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：流感病毒NS1蛋白抑制干擾素刺激基因表達及其機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：田明堯
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
流感病毒感染宿主後，會利用宿主細胞產生的蛋白質來完成自己的生命周期，其與宿主相互作用的感染免疫機制仍未完全明了。NS1蛋白是流感病毒的重要毒力因子, 可通過對干擾素的拮抗作用影響機體的抗病毒活性，但NS1蛋白對干擾素刺激基因（ISGs）及所表達蛋白的拮抗作用仍不明確。本項目擬利用流感病毒反向遺傳操作技術，構建NS基因置換重配病毒和基因突變病毒，通過對拯救毒株的生物學特性，致病性等的比較和分析，利用基因表達譜晶片比較分析強弱毒株感染小鼠與細胞（加干擾素刺激）後差異表達的基因，通過RNA干擾和過表達技術發掘感染相關基因，開展NS1蛋白對干擾素刺激基因轉錄水平影響的研究，進一步揭示流感病毒感染免疫相關分子機制，為流感病毒的預防、治療提供更多的技術思路和理論依據。
結題摘要
流感病毒感染宿主後，會利用宿主細胞產生的蛋白質來完成自己的生命周期，NS1蛋白是流感病毒的重要毒力因子, 在調節流感病毒的致病性及毒力方面發揮著重要的作用。本研究通過分析其NS1蛋白相關毒力關鍵基因區段和關鍵位點，利用流感病毒反向遺傳操作技術，對NS1不同胺基酸分別進行定點突變，拯救毒力減弱株，對重組病毒致病性開展研究。利用表達譜測序比較分析強弱毒株感染小鼠後差異表達的基因，通過發掘感染相關基因，進一步揭示流感病毒感染免疫相關分子機制。成功拯救出PR8/NS1-A149V及PR8F/NS1不同位點突變毒株。通過小鼠攻毒實驗證明PR8F/NS1蛋白第81-92位胺基酸缺失降低了對BALB/c小鼠的致病性。確定NS1第149位丙氨酸是毒力關鍵位點，證明NS1/A149V突變株能降低PR8感染哺乳動物致病能力。同時，利用數字基因表達譜比較強弱毒株感染小鼠肺組織差異表達的基因，分析特異性上調或下調的基因及通路。由於兩者IFN-β及ISGs基因表達水平基本一致，初步推測其感染小鼠致病能力減弱與拮抗干擾素作用無關。發現在人肺癌細胞系A549中，在干擾素誘導的條件下，IFITM1、2、3基因轉錄水平顯著升高。而當細胞中轉染NS蛋白基因後，IFITM1、2、3基因轉錄水平同步下降，下降幅度隨NS蛋白基因的增多而增大。表明流感NS蛋白的表達可顯著降低IFITM2、3蛋白表達水平。siRNA干擾和病毒感染實驗顯示，干擾IFITM1、2和3表達後，H5N1亞型禽流感病毒引起的細胞病變效應（CPE）增強，表明，IFITM1、2和3可以抵禦H5N1亞型禽流感病毒感染。利用穩定表達細胞系進行病毒感染，通過q-PCR方法分析結果顯示，IFITM3可抑制H5N1早期感染。本流感病毒的預防、治療提供更多的技術思路和理論依據。
