基本介紹
- 中文名：梯度洗脫
- 外文名：gradient elution
- 拼音：tiduxituo
- 別名：梯度淋洗或程式洗脫
- 定義：不斷改變流動相的濃度配比
- 領域：分析化學
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梯度洗脫
梯度洗脫（gradient
梯度洗脫的優點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。
原理及滿足條件
梯度洗脫的原理
流動相由幾種不同極性的溶劑組成，通過改變流動相中各溶劑組成的比例改變流動相的極性，使每個流出的組分都有合適的容量因子k，並使樣品中的所有組分可在最短時間內實現最佳分離。
具體地講，當樣品隨梯度起點的流動相進入色譜柱入口時，由於起點流動相中強洗脫溶劑B含量較低，化合物C1(保留性適中)和化合物C2(保留較強)因分配係數(k值)較高而滯留於色譜柱入口附近，幾乎未移動。一段時間後，B增加到一定數值，C1的k值達到足夠小(比如小於10)，其在柱中的移動速率明顯增大，並且隨著B的增加，其移動速率愈加快速，直到tC1時流出色譜柱，被檢測器檢測到並被記錄成色譜峰C1，tC1雖然比等度時的保留時間長很多，但C1的的平均k值卻很小，因而色譜峰並未展寬，靈敏度仍處於較高水平。B持續增加，在隨後的某個時間點，C2的k值也降到10以下，C2的移動速率也開始變快，以與C1類似的方式於tC2被洗脫出色譜柱，其平均k值同樣很小，色譜峰亦未展寬，靈敏度處於較高水平。
梯度洗脫特點
提高柱效，改善檢測器的靈敏度。當樣品中的一個峰的k值和最後一個峰的k值相差幾十倍至幾百倍時，使用梯度洗脫效果特別好。梯度洗脫中為保證流速的穩定，必須使用恆流泵，否則難獲重複結果。梯度洗脫常用一個弱極性的溶劑A和一個強極性的溶劑B。
如圖（兩個圖一種原理，前者為洗脫裝置和柱子之間封閉，適用於配備壓力泵的色譜柱，後者為洗脫裝置和柱子之間隔離開來，是梯度洗脫的簡易裝置。）：兩個容器放於同一水平上，兩容器連通，B與柱相連，當溶液由B流入柱時，A中的溶液就會自動來補充，經攪拌與第一容器的溶液相混合，這樣流入柱中的緩衝液的洗脫能力即成梯度變化。
洗脫要求
①洗脫液體積應足夠大，一般要幾十倍於床體積，從而使分離的各峰不致於太擁擠。②梯度的上限要足夠高，使緊密吸附的物質能被洗脫下來。③梯度不要上升太快，要恰好使移動的區帶在快到柱末端時達到解吸狀態。目的物的過早解吸，會引起區帶擴散；而目的物的過晚解吸會使峰形過寬。
梯度洗脫可分為低壓梯度(又稱為外梯度)和高壓梯度(又稱為內梯度)。
(1)低壓梯度裝置。低壓梯度是採用比例調節閥，在常壓下預先按一定的程式將溶劑混
合後，再用泵輸入色譜柱系統，也稱為泵前混合。
(2)高壓梯度裝置。由兩台(或多台)高壓輸液泵、梯度程式控制器(或計算機及接口板控
