《新型色譜固定相的合成及套用》是依託西北大學，由申燁華擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：新型色譜固定相的合成及套用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：申燁華
- 依託單位：西北大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
研究包涵體蛋白分離、純化與復性的方法對於重組蛋白藥物的發展具有重大的實際意義。液相色譜法是一種有效而理想的蛋白分離純化與復性的方法，疏水色譜作為最常用的色譜復性方法也存在局限性。本項目擬以修飾過的殼聚糖為交聯骨架，採用液氮極冷凝膠化法，在形成微球骨架的同時將N-異丙基丙烯醯胺（PNIPAAm）作為功能化的聚合物同步結合至微球的表面和微孔表面上，合成對環境溫度和pH等具有回響的多孔微球，並探討該多孔微球作為新型色譜固定相對蛋白分離純化與復性的影響。這種多功型色譜填料，可以允許純水或很低濃度的鹽溶液做流動相，具有較高的吸附載量和回收率，有望較好地解決傳統疏水色譜中存在的主要問題。本項目是一項具有潛在套用價值的基礎研究，研究結果將為該類色譜填料的工業化生產提供理論依據。
結題摘要
研究包涵體蛋白分離、純化與復性的方法對於重組蛋白藥物的發展具有重要意義。液相色譜法是一種有效而理想的蛋白分離純化與復性的方法。本項目圍繞新型色譜固定相的製備及套用進行研究，以殼聚糖、葡聚糖、瓊脂糖三類多糖為基質，成功合成2種色譜固定相，套用於標準蛋白、實際樣品的分離；合成了2種用於酶切的毛細管酶反應器和1種用於多肽分離的毛細管開管柱。主要包括：(1) 在以多糖為基質的色譜填料研究中，以葡聚糖為基質，採用液氮極冷法製備可用於蛋白分離的凝膠微球；對瓊脂糖微球進行改性，製備了溫度感應的色譜固定相；開發了一種高濃度的瓊脂糖凝膠微球，可用於多酚小分子的一步分離純化及蛋白質的凝膠過濾和脫鹽，並初步探討分離機理；(2) 以毛細管為載體，製備了一系列在毛細管內壁鍵合功能端基的固定化酶反應器，極大的提高了蛋白質酶切效率；製備的反相毛細管開管柱對多肽具有良好的分離效果；(3) 運用色譜技術，對MMP-13和Tum-5的包涵體的分離、純化及復性進行研究，並對MMPS的抑制機理進行了初步探討。上述研究成果為多糖類色譜固定相和毛細管色譜柱的開發，以及在蛋白質純化復性、多酚小分子的分離純化研究中具有重要意義。
