新冠肺炎核酸檢測:檢測原理,檢測流程,標本採集,實驗室檢測,實時螢光RT-PCR方

核酸檢測是查找患者的呼吸道標本、血液或糞便中是否存在外來入侵的病毒的核酸，來確定是否被新冠病毒感染。因此一旦檢測為核酸“陽性”，即可證明患者體內有病毒存在。

2022年5月13日，國家衛健委醫政醫管局監察專員郭燕紅在國務院聯防聯控機制新聞發布會上表示，全國有1.3萬家醫療衛生機構可以開展核酸檢測、擁有15.3萬的專業技術人員從事核酸檢測技術工作，核酸檢測能力已經能夠達到單管每日5700萬管，核酸檢測的能力，得到了顯著的提升。

2022年12月14日起，不再公布無症狀感染者數據。

2023年8月30日起，來華人員無需進行入境前新冠病毒核酸或抗原檢測。

基本介紹

中文名：新冠肺炎核酸檢測
外文名：Nucleic acid test of COVID-19
類別：檢測方法

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檢測原理

所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），新型冠狀病毒是一種僅含有RNA的病毒，病毒中特異性RNA序列是區分該病毒與其它病原體的標誌物。新型冠狀病毒出現後，中國科學家在極短的時間裡完成了對新型冠狀病毒全基因組序列的解析，並通過與其它物種的基因組序列對比，發現了新型冠狀病毒中的特異核酸序列。臨床實驗室檢測過程中，如果能在患者樣本中檢測到新型冠狀病毒的特異核酸序列，應提示該患者可能被新型冠狀病毒感染。

檢測流程

新型冠狀病毒的核酸檢測的取樣方法既不需要開刀也不需要打針，只要“輕輕一抹”。到了發熱門診或者是相應的檢查室，醫生會讓病人張開嘴，用一個像棉簽一樣的拭子去擦拭扁桃體和咽隱窩附近的分泌物（就是新聞中經常提及到的咽拭子），也可以通過鼻腔取鼻咽後部的分泌物，然後放到試管裡面，再交給檢驗科去做相應的病毒核酸的檢查。

核酸檢測需要經過取樣、留樣、保存、核酸提取、上機檢測五個步驟。

第一步需要採集人體的分泌物，用鼻拭子或咽拭子擦拭鼻腔或咽後壁及雙側咽扁桃體處；

第二步需要醫務人員進行留樣，將拭子頭浸入細胞保存液中，折斷尾部後立即旋緊管蓋；

第三步需要將樣本管放入密封袋中保存好並及時送檢；

第四步便將需樣本送進實驗室進行核酸提取；

最後一步便進行螢光PCR核酸檢測，將提取物進行螢光PCR擴增反應。

標本採集

1.鼻咽拭子：採樣人員一手輕扶被採集人員的頭部，一手執拭子，拭子貼鼻孔進入，沿下鼻道的底部向後緩緩深入，由於鼻道呈弧形，不可用力過猛，以免發生外傷出血。待拭子頂端到達鼻咽腔後壁時，輕輕旋轉一周（如遇反射性咳嗽，應停留片刻），然後緩緩取出拭子，將拭子頭浸入含2～3ml病毒保存液（也可使用等滲鹽溶液、組織培養液或磷酸鹽緩衝液）的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。

2.咽拭子：被採集人員先用生理鹽水漱口，採樣人員將拭子放入無菌生理鹽水中濕潤（禁止將拭子放入病毒保存液中，避免抗生素引起過敏），被採集人員頭部微仰，嘴張大，並發“啊”音，露出兩側咽扁桃體，將拭子越過舌根，在被採集者兩側咽扁桃體稍微用力來回擦拭至少3次，然後再在咽後壁上下擦拭至少3次，將拭子頭浸入含2～3ml病毒保存液（也可使用等滲鹽溶液、組織培養液或磷酸鹽緩衝液）的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。咽拭子也可與鼻咽拭子放置於同一管中。

3.鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。將收集器頭部插入鼻腔或氣管，接通負壓，旋轉收集器頭部並緩慢退出，收集抽取的粘液，並用3ml採樣液沖洗收集器1次（亦可用小兒導尿管接在50ml注射器上來替代收集器）。

4.深咳痰液：要求病人深咳後，將咳出的痰液收集於含3ml採樣液的採樣管中。如果痰液未收集於採樣液中，可在檢測前，加入2～3ml採樣液，或加入痰液等體積的痰液消化液。

5.支氣管灌洗液：將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入氣管（約30cm深處），注入5ml生理鹽水，接通負壓，旋轉收集器頭部並緩慢退出，收集抽取的粘液，並用採樣液沖洗收集器1次，也可用小兒導尿管接在50ml注射器上來替代收集。

6.肺泡灌洗液：局部麻醉後將纖維支氣管鏡通過口或鼻經過咽部插入右肺中葉或左肺舌段的支氣管，將其頂端契入支氣管分支開口，經氣管活檢孔緩緩加入滅菌生理鹽水，每次30～50ml，總量100～250ml，不應超過300ml。

7.糞便標本：取1ml標本處理液，挑取黃豆粒大小的便標本加至管中，輕輕吹吸3-5次，室溫靜置10分鐘，以8000 rpm離心5分鐘，吸取上清液進行檢測。

8.肛拭子：用消毒棉拭子輕輕插入肛門3～5cm，再輕輕旋轉拔出，立即放入含有3～5ml病毒保存液的15ml外螺旋蓋採樣管中，棄去尾部，旋緊管蓋。

9.血液標本：建議使用含有EDTA抗凝劑的真空採血管採集血液標本5ml，根據所選用核酸提取試劑的類型確定以全血或血漿進行核酸提取。如需分離血漿，將全血1500～2000rpm離心10分鐘，收集上清於無菌螺口塑膠管中。

10.血清標本：用真空負壓採血管採集血液標本5ml，室溫靜置30分鐘，1500～2000rpm離心10分鐘，收集血清於無菌螺口塑膠管中。

實驗室檢測

實時螢光RT-PCR方法

判斷結果

陰性:無Ct值或Ct為40。

陽性：Ct值＜37，可報告為陽性。

灰區：Ct值在37-40之間，建議重複實驗，若重做結果Ct值＜40，擴增曲線有明顯起峰，該樣本判斷為陽性,否則為陰性。

註：如使用商品化試劑盒，則以廠家提供的說明書為準。

病例確認

實驗室確認陽性病例需滿足以下兩個條件中的一個：

（1）同一份標本中新型冠狀病毒2個靶標（ORF1ab、N）實時螢光RT-PCR檢測結果均為陽性。如果出現單個靶標陽性的檢測結果，則需要重新採樣，重新檢測。如果仍然為單靶標陽性，判定為陽性。

（2）兩種標本實時螢光RT-PCR同時出現單靶標陽性，或同種類型標本兩次採樣檢測中均出現單個靶標陽性的檢測結果，可判定為陽性。

核酸檢測結果陰性不能排除新型冠狀病毒感染，需要排除可能產生假陰性的因素，包括：樣本質量差，比如口咽等部位的呼吸道樣本；樣本收集的過早或過晚；沒有正確的保存、運輸和處理樣本；技術本身存在的原因，如病毒變異、PCR抑制等。

血清抗體檢測

血清抗體檢測（膠體金、磁微粒化學發光、ELISA）用作新型冠狀病毒核酸檢測陰性病例的補充檢測，在疑似病例診斷中與核酸檢測協同使用，或用於人群血清學調查和既往暴露調查。實驗室確認陽性病例需滿足以下兩個條件中的一個：

1.血清新型冠狀病毒IgM和IgG抗體陽性；

2.血清新型冠狀病毒IgG抗體由陰性轉為陽性或恢復期較急性期有4倍及以上升高。

發病後7天內的急性期抗凝血用於IgM和IgG檢測，如果檢測結果陰性，建議發病後10天內再次採集進行檢測。發病後3-4周恢復期血清用於IgG檢測。如果採用商品化試劑盒，則以廠家說明書為準。

注意事項

做新冠肺炎核酸檢測

一、檢測前：做核酸檢測前2小時儘量避免進食，以免引起嘔吐；採樣前30分鐘做到不喝水和飲料、不吸菸、不喝酒、不咀嚼口香糖等；臨檢要減少吞咽動作，不做清嗓子（咳痰、吐痰）動作。採集鼻咽拭子前，被檢測者應告知採集人員是否有相關既往病史或相關事項。例如鼻腔手術史、鼻中隔彎曲、血液病、咽喉疾病，或服用抗凝藥等相關危險因素；檢測者需要正確佩戴口罩，檢測前取下口罩，檢測後立即戴好，可準備一個備用口罩，污染後方便隨時更換。檢測等待過程中保持“一米線”距離。

二、檢測中：在採集口咽拭子時被檢測者頭後仰，張口發出“啊”音，有助於暴露咽喉，但過程中會出現刺激性乾咳、噁心、嘔吐等症狀，被檢測者可配合採集人員儘量放鬆、深呼吸；採集過程中可能出現鼻部酸癢感，刺激打噴嚏，可立即用紙巾（提前備好）或手肘遮擋。

三、檢測後：採集後立即離開採集地點，避免在採集地點周圍吐痰，嘔吐。核酸檢測前後都需要注意手部衛生，可使用免洗手消毒液或免洗酒精擦拭雙手。另外為了能提高效率，可提前準備：由於醫護人員防護嚴密，可能聽不清講話，同時也是為了提高效率，請務必一定帶好身份證或戶口本，佩戴口罩（最好帶兩個，其中一個備用），帶包紙巾（採集可能引發不適流淚），可以提前把姓名、身份證號、現在住址、聯繫電話，提前寫張紙條（寫的時候注意請保持字型工整，防止工作人員無法識別）交給相關人員！

大規模核酸檢測組織管理

要做好工作預案和組織管理。要求各地提前做好工作預案，明確組織架構，理順從“採樣-轉運-檢測-結果回報”全鏈條的工作流程。同時為做到高效轉運，需要統籌檢測機構布局和檢測能力等，利用信息化系統很快把檢測結果回報給公眾。“做好工作預案非常重要，一旦疫情需要開展大規模核酸檢測，各部門能夠迅速地啟動預案，協調配合做好‘采、送、檢、報’全流程工作來提高效率。

原則上以小區為單位設定採樣點。採樣點的布局要綜合人口數量、地理交通以及核酸檢測機構的布局，可以參考每2000-3000人來設定一個採樣點，每600-800人設定一個採樣台。

要加強採樣現場的組織管理。要設立清晰的指引標識，規劃好進出路線，保證所有的採樣人員是單向流動，而且要明確採樣流程和注意事項。為了避免人員聚集，要求提前通知大家，做好分時段的預約，避免老百姓排隊時間過長或者是人員過於集中，縮短排隊時間，減少大家在短時間內聚集。同時，要求現場配備好工作人員、志願者來加強採樣秩序的維護，並指導公眾做好個人防護以及信息採集。對於特殊人群，比如老年人、孕婦、孩子，要求設立“綠色通道”，讓他們順暢完成採樣，同時也增強人性化的關懷。

社會公眾也要給予積極配合。參加核酸檢測的公眾要戴口罩，不聚集，保持安全距離，自覺地服從現場工作人員的指引，而且採樣過程中不要觸碰採樣台及採樣台上任何物品，採樣結束後儘快戴上口罩，迅速離開現場。做好大規模核酸檢測採樣工作是很不容易的，需要精細的組織管理工作，同時也需要公眾非常好的配合。

檢測價格

2021年1月份，各省集中下調公立醫院核酸檢測的政府指導價，單人單檢從每人份120元以上降至80元左右。

截至9月16日，已有廣東、湖北、上海、天津、河北等總計30個省份下調公立醫院新冠病毒核酸檢測價格，絕大多數省份將單人單檢價格降至每人份60元或更低水平，10人混檢價格降至每人份15元或更低水平。

2021年12月10日起，雲南核酸檢測價格再次下調，總費用（含檢測費用和單獨收費的核酸檢測試劑）不超過40元/次。

2021年12月11日起，北京市公立醫療機構新冠病毒核酸檢測單樣本價格由58元降低至35元/次，5樣本、10樣本混合檢測價格同步由每樣本18元、13元統一降低至8元。

2021年12月3日，河南省醫療保障局等六部門聯合印發《關於進一步降低新型冠狀病毒核酸檢測項目價格的通知》，明確自2021年12月10日起， 新型冠狀病毒核酸檢測（標本單采）項目價格由50元/人次下調至30元/人次（不含核酸檢測擴增試劑），新型冠狀病毒核酸檢測（標本混采）項目價格由15元/人次下調至10元/人次。

2021年12月30日，廣東省發展改革委、廣東省財政廳發布《關於進一步降低疾控機構新冠病毒核酸檢測收費標準的通知》（以下簡稱“通知”），核酸單樣檢測最高40元。

2022年3月，根據疫情防控需要，國務院聯防聯控機制綜合組研究決定，推進“抗原篩查、核酸診斷”的監測模式，在核酸檢測基礎上增加抗原檢測作為補充。社區居民有自我檢測需求的，可通過零售藥店、網路銷售平台等渠道，自行購買抗原檢測試劑進行自測。

2022年5月1日，河南再次降低新冠病毒核酸檢測價格，自5月1日起混采每人4元。

自2022年5月20日起，深圳市新冠病毒核酸單人單檢價格降至每人份不超過18元（其中檢測服務費降至每人份不超過12.5元）；核酸多人混檢價格降至每人份不超過5元，政府組織的大規模篩查、常態化檢測的多人混檢價格降至每人份不超過3元；抗原檢測價格降至每人份不超過6元（其中檢測服務費降至每人份不超過2元）。

2022年5月23日，國家醫保局辦公室、國務院應對新型冠狀病毒肺炎疫情聯防聯控機制醫療救治組印發《關於進一步降低新冠病毒核酸檢測和抗原檢測價格的通知》，要求各地在6月10日前將新冠病毒核酸檢測單人單檢降至不高於每人份16元，多人混檢降至不高於每人份5元。

自2022年6月10日起，河南省新冠病毒核酸檢測標本單采項目價格由24元/人次下調至16元/人次（含相關試劑及耗材），新冠病毒抗原檢測項目價格由15元/人次下調至6元/人次（含相關試劑及耗材）。

新冠肺炎核酸檢測