免疫放射自顯影術（autoradiography)：通過檢測放射性標記物質在細胞內的定位來觀察某一特定生化反應過程的技術。首先，將放射性同位素或放射性同位素的標記物注入動物體內或加入培養基中，間隔一定時間取材，製成標本（如切片），在暗室中於標本的上面塗以液體原子核乳膠，置暗處曝光，數日後再經顯影和定影處理，或經染色後光鏡觀察，在放射性同位素或其標記物存在的部位，溴化銀被還原成黑色的微細銀顆粒，也可在電鏡下觀察則稱之為電鏡放射自顯影術(electron microscope autoradiography)由此，可獲知被檢物質在機體、組織與細胞內的分布、數量及代謝徑路。
在生物學研究中，常用的放射性同位素主要是能量低、射程短、電離作用強β的射線如3H，14C，32P，35S，125I，45Ca，等或其它化合物。例如將125I注入體內可觀察碘在甲狀腺內的碘化部位及過程；又如把3H標記的胸腺嘧啶苷或胺基酸注入體內，可以研究細胞內DNA合成及蛋白質合成及其代謝過程。還可對標本中銀顆粒數目進行定量分析；也可用液體閃爍計數器對細胞或勻漿的放射強度進行定量研究。
基本介紹
- 中文名：放射自顯影術
- 外文名：autoradiography
- 方法：詳見正文
- 含義：檢測放射性標記物質的技術
原理,聯合使用,關係,
原理
免疫放射自顯影
放射自顯影的原理是利用放射性同位素所發射出來的帶電離子(α或β粒子)作用於感光材料的鹵化銀晶體，從而產生潛影，這種潛影可用顯影液顯示，成為可見的"像"，因此，它是利用鹵化銀乳膠顯像檢查和測量放射性的一種方法。
放射性核素的原子不斷衰變，當衰變掉一半時所需要的時間稱為半衰期。各种放射性核素的半衰期長短不同(表)，在自顯影實驗中多選用半衰期較長者。對於半衰期較短的核素，應選用較快的樣品製備方法，所用劑量也應加大。
聯合使用
與染色技術聯合使用
用放射自顯影能夠研究的任何細胞特徵或抗原物質定位也可以用放射自顯影和免疫染色聯合進行研究。特別之處是同時進行抗原定位研究，操作過程直截了當。細胞用適當的方法進行放射性標記，接著進行固定和按所選用的免疫染色法進行染色(注意：此時樣品和洗滌後的溶液應該作為放射性物品處理)。然後對細胞樣品進行放射自顯影，可以同時進行顯影銀粒和免疫染色觀察。
關係
放射自顯影與免疫染色聯合套用最常用於研究DNA合成與抗原定位表達之間的關係。這時細胞用3H_TdR標記後，進行免疫染色和放射自顯影。這個方法能夠敏感而精確地研究正在進行DNA合成的細胞中抗原表達的位置。儘管如此，一般情況下建議用雙標記法進行這類研究，在細胞培養基中加入BrdU標記新合成的DNA，接著用2種不同顏色染料標記的抗體按上述雙標記法進行細胞染色，其中抗體之一是針對BrdU的抗體(已經商品化)，而另一種抗體是針對所研究的抗原。
