實時螢光定量

實時螢光定量，是指在PCR反應體系中加入螢光基團，利用螢光信號積累實時監測整個PCR進程，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。於1996年推出。在螢光定量PCR技術中Ct值的含義為：每個反應管內的螢光信號到達設定的閾值時所經歷的循環數，C代表cycle，t代表threshold。

突光閾值以PCR反應的前15個循環的螢光信號作為螢光本底信號，螢光閾值的預設設定是3〜15個循環的螢光信號標準偏差的10倍。每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存線上性關係，起始拷貝數越多，G值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代表Ct值。