多重耐藥相關蛋白與HBV對核苷類似物抗病毒藥物耐藥

《多重耐藥相關蛋白與HBV對核苷類似物抗病毒藥物耐藥》是依託華中科技大學，由鄭昕擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：多重耐藥相關蛋白與HBV對核苷類似物抗病毒藥物耐藥
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：鄭昕
• 依託單位：華中科技大學

中文摘要

迄今，HBV耐藥變異僅能解釋部分B肝患者中對核苷類似物抗病毒治療耐藥的機制。仍有相當一部分患者的耐藥機制特別是原發性耐藥的機制並不清楚。本研究首次從宿主肝細胞膜上表達的多重耐藥相關蛋白4,5,7,8（Multi-drug resistance protein, MRP）對核苷類似物的吸收和代謝的角度來探討HBV藥物耐受的新機制。利用B肝患者和高壓尾靜脈注射建立的慢性HBV感染小鼠模型，確定MRP在肝臟和PBMC中的表達及相關性; 套用HBV野生株、ETV耐藥突變株和多藥耐藥突變株建立的穩定複製細胞系或持續複製的小鼠模型，通過轉染MRP表達質粒上調或siRNA/MRP抑制劑下調MRP在細胞系或小鼠肝臟中的表達，給予不同核苷類似物處理後，觀察MRP表達水平對核苷類似物吸收和代謝及抗病毒效應的影響。這將為探索新的個體化治療評估指標，提高核苷類似物抗HBV藥物的療效奠定實驗和理論基礎。

結題摘要

HBV耐藥突變和治療依從性差被認為是核苷酸類似物（NA）耐藥的兩大因素。但是，病毒突變並不能完全解釋NA耐藥發生的現象。研究顯示多重耐藥相關蛋白4（MRP4）與抗逆轉錄病毒治療的NA耐藥相關，MRP4是否與慢性乙型病毒性肝炎（CHB）的NA耐藥相關尚不清楚。採用實時定量PCR、western blot及免疫組化方法檢測MRP4在健康對照及慢B肝外周血單個核細胞（PBMCs）、肝組織和肝癌細胞系中的表達。經MRP抑制劑或干擾RNA慢病毒下調MRP4表達，經MRP4過表達慢病毒上調MRP4表達，並通過定量PCR和DNA測序檢測HBVDNA水平和進行HBV突變分析。經高液相質譜聯用方法檢測在有或沒有MRP4抑制劑條件下細胞內外的NAs濃度。在NA耐藥（原發性耐藥，部分病毒血應答及病毒血突破）患者的PBMCs中的MRP4表達明顯升高，且MRP4在PBMCs中的蛋白表達與其在對應的肝癌旁組織中的表達具有相關性。抑制或敲除MRP4體外增加了NAs的藥物敏感性（除對恩替卡韋耐藥的HepG2.A64細胞系），而過表達MRP4則降低了NAs的藥物敏感性。MRP抑制劑可增加細胞內的NAs濃度，而降低細胞外的NAs水平。MRP4高表達可能是HBV對NA耐藥的一個宿主因素，並有望成為抑制HBV耐藥的一個靶向蛋白。