基於核酸適配體的酶分子檢測法

《基於核酸適配體的酶分子檢測法》是依託山西大學，由趙強擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：基於核酸適配體的酶分子檢測法
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：趙強
• 依託單位：山西大學

項目摘要

本項目擬建立一種基於核酸適配體的檢測酶分子的新方法，發揮核酸適配體在製備和穩定性等方面的優勢，同時結合待測酶分子的催化反應活性，提高檢測的靈敏度和特異性。研究工作將以具有重要生理意義的中性粒細胞彈性蛋白酶為檢測對象，通過幾種不同的檢測平台來開展。利用鏈霉親和素和生物素之間的相互作用，將生物素標記的可特異性識別中性粒細胞彈性蛋白酶的核酸適配體固定在鏈霉親和素修飾的磁性微球，酶標板，或色譜柱上，核酸適配體從樣品中選擇性地捕獲目標酶分子，加入可產生螢光產物的底物，通過酶分子的催化放大和高靈敏度的螢光檢測，將實現對目標酶分子的高特異性和高靈敏度檢測，進一步將其套用於實際樣品測定。該檢測方法將克服基於免疫抗體方法的局限性，實現酶生物標誌物的高靈敏檢測，在臨床診斷和醫學研究等領域具有重要意義。

結題摘要

一些酶分子是重要的生物標誌物，靈敏檢測酶分子在疾病診斷和基礎研究中具有重要的意義。充分發揮核酸適配體的優勢，利用核酸適配體的高親和力和特異性和酶催化反應的選擇性與信號放大特性，本項目發展了一種新穎的基於核酸適配體的酶分子檢測方法。將核酸適配體固定到固相基底（磁球或微孔板）上，適配體特異性捕獲富集待測的酶分子，捕獲到的酶分子選擇性催化水解底物產生產物，通過檢測產物實現對待測酶分子的高靈敏和高特異性檢測。研究工作中選取凝血酶和彈性蛋白酶等酶分子作為目標分子，建立了高靈敏、高特異的檢測方法，並實現了在複雜樣品如血清中凝血酶和彈性蛋白酶的檢測。利用適配體親和捕獲富集，酶反應放大，採用螢光底物時，分別實現了對2 fM 凝血酶或20 fM彈性蛋白酶的檢測。所建立的方法可以用於製備簡便的檢測試劑盒，便於實際套用，所發展的方法將有利於疾病診斷和基礎研究中對一些目標酶分子的檢測。