內容簡介
《哺乳動物生殖工程學》以個體發生時序為主線,論述了哺乳動物生殖調控機理及其相關套用技術。對配子體外操作、體外受精、配子與胚胎保存、胚胎移植、性別控制、動物克隆、表觀遺傳、幹細胞技術、發育的大數據分析、基因編輯與轉基因動物製備等分別做了較為詳盡的專門介紹。其主要特點是注重理論與實踐的結合,系統闡述了各類生殖工程的基本原理與技術操作程式,融入了生殖工程學領域的新研究進展,提供了大量實用的研究方法和套用技術,為生殖工程領域的科學研究、生產實踐及解決動物繁殖與育種中存在的實際問題提供了可靠的實用工具。
目錄
前言
緒論 1
一、人類對生殖活動的認知 1
二、生殖細胞 3
三、哺乳動物個體發生 3
四、生殖生物技術的發展 4
五、生殖生物技術在動物繁殖中的套用 9
六、生殖生物學基礎研究的熱點與發展趨勢 10
參考文獻 12
第一章 卵母細胞體外成熟 13
第一節 卵母細胞成熟的特徵 13
一、卵丘細胞的成熟 13
二、透明帶的成熟 15
三、卵母細胞的細胞膜成熟 16
四、卵母細胞的細胞核成熟 18
五、卵母細胞的細胞質成熟 22
第二節 卵母細胞體外成熟培養 25
一、卵巢卵母細胞的收集 25
二、卵母細胞成熟培養操作 27
三、小鼠卵母細胞體外成熟培養操作要點 29
四、家畜卵母細胞體外成熟培養操作要點 29
第三節 卵母細胞的質量評價方法 30
一、物理方法 31
二、化學方法 33
三、體外受精、體外胚胎培養評定法 35
第四節 影響卵母細胞體外成熟的因素 35
一、影響卵母細胞體外成熟的主要因素 35
二、促進卵母細胞體外成熟的措施39
參考文獻 40
第二章 體外受精 43
第一節 哺乳動物體外受精的研究簡史凳籃歡婆 43
第二節 精液與精子的生物學特性 46
一、精液的主要常規參數 46
二、有再灑關精子的一些生物學數據 49
第三節 精子獲能 51
一、精子獲能原理 51
二、精子獲能處理 54
三、提高精子活力的措施 59
四、精子獲能的檢測59
五、影響精子體外獲能的因素 62
六、體外誘導頂體反應 63
第四節 實驗動物的體外受精操作 65
一、小鼠的體外受精操作 65
二、大鼠的體外受精操作 69
三、兔的體外受精操作 72
第五節 家畜的體外受精操作74
一、牛的體外受精操作 74
二、綿羊與山羊的體外受精操作 78
三、豬的體外受精操作 79
四、不同動物體外受精操作的主要參考指標 83
第六節 顯微受精 83
一、顯微受精研究概況 83
二、ICSI 操作過程 85
三、影響顯微受精的因素 89
四、ICSI 的轉基因套用 91
參考文獻 91
第三章 胚胎體外生產 94
第一節 哺乳動物早期胚胎髮育 95
一、母源—合子基因轉變 95
二、緻密化的桑椹胚形成 100
三、囊胚形成機制 102
四、囊胚孵化機制 104
五、胚胎的細胞凋亡 106
第二節 胚胎體外發育阻滯與胚胎能量代謝 107
一、胚胎體外發育阻滯現象和機理 107
二、胚胎體外發育阻滯的克服109
三、早期胚胎髮育的能量腿詢洪代謝途徑 111
第三節 培養系統 112
一、培養用具的選擇與要求 112
二、氣相條件 113
三、培養溫度 114
四、光照 115
五、濕度 115
六、培養液 115
第四節 胚胎培養液 115
一、幾種動物輸卵管液的化學成分 116
二、培養液的種類和組成 117
三、培養液中主要成分的作用 126
四、培養液的配製方狼地凶法 128
第五節 胚胎收集與胚胎培養體系 129
一、胚胎收集 129
二、胚胎培養體系 132
第六節 胚胎質量評價 136
一、胚胎細胞計數方法 137
二、胚胎細胞計數具體操作 139
三、胚胎與胎兒細胞的染色體分析技術 141
四、囊胚輔助孵化技術143
五、胚胎細胞凋亡檢測分析技術 145
六酷請嬸、哺乳動物早期胚胎蛋白質組學分析 147
七、代謝組學的胚胎質量評估 149
八、多潛能基因表達檢測技術 150
第七節 胚胎體外生產與套用技術體駝槓巴巴系 151
一、牛胚胎體外生產技術體系 151
二、綿羊胚胎體外生產技術體系 158
三、山羊胚胎體外生產技術體系 162
參考文獻165
第四章 孤雌生殖與孤雄生殖 168
第一節 單性生殖的研究簡史 168
一、朱冼與他的單性繁殖研究168
二、哺乳動物的單性生殖研臭歸只究169
第二節 孤雌激活與孤雌生殖 170
一、孤雌激活的機理 170
二、孤雌激活的方法 172
三、孤雌激活操作 174
四、卵母細胞孤雌激活的類型176
五、孤雌胚的發育 177
第三節 孤雄生殖 178
一、孤雄胚胎的製作方法 178
二、孤雄胚胎的發育 180
三、孤雄胚胎幹細胞 181
四、單倍體胚胎幹細胞181
參考文獻183
第五章 動物克隆技術 186
第一節 細胞核移植的研究簡史 187
一、細胞核移植技術構想的提出 187
二、無尾兩棲動物細胞核移植研究 188
三、魚類細胞核移植研究 189
四、哺乳類細胞核移植研究 190
五、異種動物的核移植 192
第二節 細胞核移植的基本程式192
一、供體細胞的選擇 192
二、受體胞質的選擇 194
三、受體胞質與供體核的細胞周期同步性 195
四、核移植操作 196
五、細胞融合198
六、克隆胚胎激活 200
七、克隆胚胎培養 203
八、克隆胚胎移植 204
九、克隆動物鑑定 204
第三節 小鼠體細胞核移植技術204
一、小鼠核移植操作的基本程式 204
二、顯微注射針的準備206
三、去核針或注核針的安裝及Piezo 調試 207
四、卵母細胞的收集 208
五、去核操作 209
六、供核體細胞的準備 210
七、供體核注射 210
八、融合胚的激活和培養 211
九、克隆胚胎的移植 213
第四節 牛體細胞核移植技術 213
一、卵母細胞的成熟培養 213
二、體細胞培養與供核體細胞的選擇215
三、去核操作 218
四、注核操作 219
五、融合 219
六、融合胚的激活 219
七、胚胎培養和囊胚質量鑑定 221
八、囊胚的核型分析 221
九、胚胎移植和妊娠檢查 222
十、克隆牛生產與克隆犢牛護理 223
十一、克隆牛的繁殖與套用 227
第五節 羊與其他動物的體細胞核移植技術 227
一、羊克隆技術要點 228
二、豬克隆技術要點 232
三、馬(或騾)克隆技術要點234
四、克隆動物研究進展236
第六節 影響體細胞核移植的因素 237
一、體細胞克隆存在的主要問題 237
二、影響克隆效率的因素 239
第七節 克隆動物的健康與食品安全性244
一、克隆動物的健康 244
二、克隆動物的行為 245
三、克隆動物的生態適應性 246
四、克隆動物的食品安全 250
第八節 異種核移植 251
一、異種核移植的研究歷史 251
二、異種核移植胚胎基因組激活和基因表達 252
三、異種核移植胚胎線粒體異質性 253
第九節 胚胎分割 254
一、胚胎分割方法 255
二、分割胚的發育 257
三、胚胎分割技術存在的問題 259
四、胚胎分割技術的意義 259
第十節 嵌合體製作技術 260
一、嵌合體研究的目的與意義 260
二、嵌合體的製作方法 260
三、嵌合體分析 264
四、嵌合體技術的意義 265
參考文獻 266
第六章 性別決定與性控技術 275
第一節 哺乳動物性別決定原理 276
一、性染色體上的性別決定基因 278
二、Sry 是TDF 的證據280
三、與睪丸決定有關的基因 282
四、與卵巢決定有關的基因 284
五、SRY 的作用及性腺細胞間的相互作用 286
六、動物性別決定模型 287
第二節 哺乳動物胚胎性別鑑定的傳統方法 288
一、細胞遺傳學方法 288
二、免疫學方法(H-Y 抗原法) 289
三、H-Y+精子與H-Y–精子的分離 290
四、X 染色體相關酶法鑑定胚胎性別 291
五、分子生物學方法 292
六、SRY-PCR法 293
七、其他方法294
第三節 X 精子、Y 精子分離技術 295
一、分離精子的理論基礎 296
二、精液分離速度 298
三、分離精子準確率的評價方法 299
四、性控精液的產犢準確率 301
第四節 性控精液的套用301
一、分離精子的人工輸精 302
二、性控精液的體外受精 302
三、性控精液在奶牛生產中的套用 303
四、性控冷凍精液存在的問題 303
五、受精環境對哺乳動物性別形成的影響 304
參考文獻 306
第七章 配子與胚胎保存 311
第一節 胚胎的短期保存 311
一、異種動物體內保存 312
二、胚胎的低溫保存 313
第二節 程式化超低溫冷凍保存技術 316
一、超低溫冷凍保存的原理 316
二、冷凍保護劑 318
三、冷凍保存的方法 320
四、冷凍保存的操作程式 321
五、冷凍胚胎解凍後的活力鑑定 325
六、程式化胚胎冷凍研究進展325
第三節 玻璃化冷凍保存技術 329
一、玻璃化冷凍保存的原理 329
二、玻璃化冷凍保存的操作要求 330
三、玻璃化冷凍方法 330
四、玻璃化冷凍保存具體操作 332
五、影響玻璃化冷凍效果的可能因素 334
六、玻璃化冷凍保存技術研究進展 336
第四節 卵母細胞的冷凍保存 338
一、卵母細胞的冷凍損傷 339
二、卵母細胞冷凍保存操作 341
三、卵母細胞冷凍保存進展與存在的問題 343
第五節 精液的冷凍保存345
一、精液的冷凍過程及其對精子的損傷 346
二、精液稀釋液中的添加劑 348
三、牛冷凍精液生產操作過程350
四、羊冷凍精液生產操作過程352
五、豬冷凍精液生產操作過程354
六、精液冷凍保存的發展趨勢356
參考文獻357
第八章 配子與胚胎髮生的表觀遺傳學 363
第一節 表觀遺傳學原理364
一、DNA 甲基化與去甲基化 364
二、組蛋白修飾 367
三、染色質重塑 372
四、假基因 378
五、非編碼RNA 379
第二節 配子發生過程中的表觀遺傳現象 382
一、PGC 分化過程存在廣泛的表觀遺傳修飾 382
二、雌雄生殖細胞印記的重建385
三、精母細胞減數分裂過程中的表觀遺傳修飾 386
四、卵母細胞減數分裂過程中的表觀遺傳修飾 387
五、DNA 羥甲基化修飾 389
第三節 胚胎髮育過程中的表觀遺傳學修飾 390
一、胚胎早期發育過程中的基因組DNA 甲基化修飾 391
二、胚胎髮育過程中的DNA 羥甲基化修飾 392
三、胚胎髮育過程中的組蛋白修飾變化 393
四、克隆胚胎中的表觀遺傳修飾 396
五、異種核移植胚胎的核重塑 401
第四節 表觀遺傳系統的生物學意義 403
一、表觀遺傳學與疾病 403
二、環境對表觀遺傳學的影響 408
三、表觀遺傳學在動物
四、核移植操作 196
五、細胞融合198
六、克隆胚胎激活 200
七、克隆胚胎培養 203
八、克隆胚胎移植 204
九、克隆動物鑑定 204
第三節 小鼠體細胞核移植技術204
一、小鼠核移植操作的基本程式 204
二、顯微注射針的準備206
三、去核針或注核針的安裝及Piezo 調試 207
四、卵母細胞的收集 208
五、去核操作 209
六、供核體細胞的準備 210
七、供體核注射 210
八、融合胚的激活和培養 211
九、克隆胚胎的移植 213
第四節 牛體細胞核移植技術 213
一、卵母細胞的成熟培養 213
二、體細胞培養與供核體細胞的選擇215
三、去核操作 218
四、注核操作 219
五、融合 219
六、融合胚的激活 219
七、胚胎培養和囊胚質量鑑定 221
八、囊胚的核型分析 221
九、胚胎移植和妊娠檢查 222
十、克隆牛生產與克隆犢牛護理 223
十一、克隆牛的繁殖與套用 227
第五節 羊與其他動物的體細胞核移植技術 227
一、羊克隆技術要點 228
二、豬克隆技術要點 232
三、馬(或騾)克隆技術要點234
四、克隆動物研究進展236
第六節 影響體細胞核移植的因素 237
一、體細胞克隆存在的主要問題 237
二、影響克隆效率的因素 239
第七節 克隆動物的健康與食品安全性244
一、克隆動物的健康 244
二、克隆動物的行為 245
三、克隆動物的生態適應性 246
四、克隆動物的食品安全 250
第八節 異種核移植 251
一、異種核移植的研究歷史 251
二、異種核移植胚胎基因組激活和基因表達 252
三、異種核移植胚胎線粒體異質性 253
第九節 胚胎分割 254
一、胚胎分割方法 255
二、分割胚的發育 257
三、胚胎分割技術存在的問題 259
四、胚胎分割技術的意義 259
第十節 嵌合體製作技術 260
一、嵌合體研究的目的與意義 260
二、嵌合體的製作方法 260
三、嵌合體分析 264
四、嵌合體技術的意義 265
參考文獻 266
第六章 性別決定與性控技術 275
第一節 哺乳動物性別決定原理 276
一、性染色體上的性別決定基因 278
二、Sry 是TDF 的證據280
三、與睪丸決定有關的基因 282
四、與卵巢決定有關的基因 284
五、SRY 的作用及性腺細胞間的相互作用 286
六、動物性別決定模型 287
第二節 哺乳動物胚胎性別鑑定的傳統方法 288
一、細胞遺傳學方法 288
二、免疫學方法(H-Y 抗原法) 289
三、H-Y+精子與H-Y–精子的分離 290
四、X 染色體相關酶法鑑定胚胎性別 291
五、分子生物學方法 292
六、SRY-PCR法 293
七、其他方法294
第三節 X 精子、Y 精子分離技術 295
一、分離精子的理論基礎 296
二、精液分離速度 298
三、分離精子準確率的評價方法 299
四、性控精液的產犢準確率 301
第四節 性控精液的套用301
一、分離精子的人工輸精 302
二、性控精液的體外受精 302
三、性控精液在奶牛生產中的套用 303
四、性控冷凍精液存在的問題 303
五、受精環境對哺乳動物性別形成的影響 304
參考文獻 306
第七章 配子與胚胎保存 311
第一節 胚胎的短期保存 311
一、異種動物體內保存 312
二、胚胎的低溫保存 313
第二節 程式化超低溫冷凍保存技術 316
一、超低溫冷凍保存的原理 316
二、冷凍保護劑 318
三、冷凍保存的方法 320
四、冷凍保存的操作程式 321
五、冷凍胚胎解凍後的活力鑑定 325
六、程式化胚胎冷凍研究進展325
第三節 玻璃化冷凍保存技術 329
一、玻璃化冷凍保存的原理 329
二、玻璃化冷凍保存的操作要求 330
三、玻璃化冷凍方法 330
四、玻璃化冷凍保存具體操作 332
五、影響玻璃化冷凍效果的可能因素 334
六、玻璃化冷凍保存技術研究進展 336
第四節 卵母細胞的冷凍保存 338
一、卵母細胞的冷凍損傷 339
二、卵母細胞冷凍保存操作 341
三、卵母細胞冷凍保存進展與存在的問題 343
第五節 精液的冷凍保存345
一、精液的冷凍過程及其對精子的損傷 346
二、精液稀釋液中的添加劑 348
三、牛冷凍精液生產操作過程350
四、羊冷凍精液生產操作過程352
五、豬冷凍精液生產操作過程354
六、精液冷凍保存的發展趨勢356
參考文獻357
第八章 配子與胚胎髮生的表觀遺傳學 363
第一節 表觀遺傳學原理364
一、DNA 甲基化與去甲基化 364
二、組蛋白修飾 367
三、染色質重塑 372
四、假基因 378
五、非編碼RNA 379
第二節 配子發生過程中的表觀遺傳現象 382
一、PGC 分化過程存在廣泛的表觀遺傳修飾 382
二、雌雄生殖細胞印記的重建385
三、精母細胞減數分裂過程中的表觀遺傳修飾 386
四、卵母細胞減數分裂過程中的表觀遺傳修飾 387
五、DNA 羥甲基化修飾 389
第三節 胚胎髮育過程中的表觀遺傳學修飾 390
一、胚胎早期發育過程中的基因組DNA 甲基化修飾 391
二、胚胎髮育過程中的DNA 羥甲基化修飾 392
三、胚胎髮育過程中的組蛋白修飾變化 393
四、克隆胚胎中的表觀遺傳修飾 396