《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》是江蘇康緣藥業股份有限公司於2002年8月23日申請的發明專利，該專利的公布號為CN1424031A，專利公布日為2003年6月18日，發明人為樓鳳昌、蕭偉、戴翔翎、凌婭、李明慧、王穎、畢宇安，該發明屬於藥物領域。
《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》公開了一種銀杏內酯注射劑，該注射劑含有銀杏內酯和葡甲胺，銀杏內酯包括銀杏內酯A、B、K，並且該銀杏內酯注射劑產品符合指紋圖譜的要求，產品質量可控，穩定較好，並且在加入葡甲胺的情況下，對銀杏內酯有很好的助溶作用。該發明還公開了含有銀杏內酯A、B、K的藥物組合物。
2017年5月12日，《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》獲得第十屆江蘇省專利項目優秀獎。
（概述圖為《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》摘要附圖）
基本介紹
- 中文名：含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝
- 申請人：江蘇康緣藥業股份有限公司
- 申請號：02128962X
- 公布號：CN1424031A
- 授權日：2003年6月18日
- 申請日：2002年8月23日
- 地址：江蘇省連雲港市新浦區海昌南路58號
- 發明人：樓鳳昌、蕭偉、戴翔翎、凌婭、李明慧、王穎、畢宇安
- Int.Cl.：A61K31/365（2006.01）、A61P9/10（2006.01）
- 代理機構：北京太兆天元專利代理有限責任公司
- 代理人：張韜
- 類別：發明專利
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,附圖說明,權利要求,實施方式,榮譽表彰,
專利背景
銀杏內酯是從中草藥銀杏葉當中提取獲得的有效物質，該物質從結構上還可以進一步細分為銀杏內酯A、B、C、K（銀杏內酯K是發明人新發現的一個銀杏內酯單體，已另案申請）等，對於銀杏內酯的提取方法已經有詳細的文獻報導，例如，李新崗等人介紹了銀杏內酯的實驗室提取方法（參見李新崗等，銀杏葉中銀杏內酯的實驗室提取方法研究，中國醫藥工業雜誌1998年第1期），中國專利文獻CN1195665A介紹了銀杏內酯的提取方法和含有銀杏內酯的製劑，該方法是將銀杏葉用水煮沸提取，用吸附劑對提取濾液吸附，再用乙醇脫附，回收乙醇，將析出的結晶溶解，重結晶，乾燥製得銀杏內酯。中國專利文獻CN1313287A公開了一種銀杏內酯的生產工藝。從銀杏內酯的總提取物當中分離銀杏內酯單體的方法，也有很多相關的文獻報導，例如，游松等人介紹了銀杏葉中銀杏內酯的分離與結構測定方法（參見游松等，銀杏葉中銀杏內酯的分離與結構測定，中國藥物化學雜誌1995年第4期）。中國專利文獻CN1287121A公開了由銀杏葉或銀杏葉浸膏製備藥物銀杏內酯A、B的方法。銀杏內酯作為一個有效的活性物質，可以將其製備成不同的臨床藥物劑型。用銀杏內酯製備注射劑的方法已經在中國專利文獻CN1315175A當中公開。劉潔等使用銀杏葉注射劑治療急性腦梗塞取得了一定療效[參見劉潔等，銀杏葉注射液對急性腦梗塞後肢體運動功能及TXB_2、6-Keto-PGF_（1a）的影響]。關於銀杏內酯的藥理作用，已經有較為詳細的文獻報導（參見陳維軍等，銀杏內酯的化學結構及藥理作用研究進展，中國藥學雜誌1998年第9期）。儘管2002年8月前已有技術當中對於銀杏內酯及其製劑的研究已經有很多的報導，但是，對於銀杏內酯的研究一直沒有停止，特別是對於銀杏內酯單體的分離及其衍生物的研究，不斷有文獻報導。截至2002年8月，對於銀杏內酯當中有效單體的研究，已經報導了銀杏內酯A、B、C等結構，將銀杏內酯製備成注射劑，很重要的一項技術問題是對產品質量的控制，尚沒有發現能夠準確控制銀杏內酯注射液產品當中有效成分含量的方法，而且，銀杏內酯注射劑製備過程當中，對於助溶劑的選擇也非常重要，這直接影響到產品的穩定性和臨床療效。《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》通過銀杏內酯注射液產品當中有效成份指紋圖譜的測定，控制產品的質量，特別是，在發現了銀杏內酯K的結構基礎上，增加了一個新的質量控制指標，使得銀杏內酯注射劑的工業化生產得以實現，並且通過實驗研究，選擇了理想的助溶劑，從而能夠很好的控制銀杏內酯注射劑產品的穩定性，完成了該發明。
發明內容
專利目的
《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》目的是提供一種含有銀杏內酯的製劑，特別是銀杏內酯注射劑，同時還提供該注射劑的製備工藝。
技術方案
《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》所述的銀杏內酯注射劑是以高純度的銀杏內酯為有效成份製備而成，注射液各組份的重量比為：銀杏內酯:葡甲胺:氯化鈉＝（2-8）:（2-8）:（4-12）；上述組份的優選重量配比為：銀杏內酯:葡甲胺:氯化鈉＝（4-6）:（4-6）:（6-10）；上述組份的優選重量配比為：銀杏內酯:葡甲胺:氯化鈉＝5:5:8；其中還可以加入適量的10％檸檬酸溶液。
以製備1000毫升該發明的銀杏內酯注射劑計算，其組成如下：銀杏內酯5.0克、葡甲胺5.0克、NaCl8.0克、10％檸檬酸溶液適量。
《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》銀杏內酯注射劑的製備方法如下：取葡甲胺加新鮮注射用水1000毫升溶解，於120℃高壓滅菌30分鐘，取出後於一萬級配料室加熱至80℃，加入研細過80目篩的銀杏內酯，加熱至溶解，冷卻至室溫後用10％的檸檬酸水溶液調pH至8.0，加入NaCl8.0克，針用活性炭2.0克，室溫攪拌吸附30分鐘，過濾除炭，加新鮮注射用水至總量1000毫升，於100級無菌車間用無菌濾板下襯0.22微米微孔濾膜過濾，分裝於10毫升安瓿熔封，質檢，印字，包裝。
製備《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》銀杏內酯注射劑所使用的銀杏內酯原料，可以通過已知的提取方法提取，或者通過市售購得，但是，該原料需符合按如下方法測定的指紋圖譜標準。
銀杏內酯的指紋圖譜測定：
1.供試品溶液製備
精密稱取於105℃乾燥至恆重的銀杏內酯樣品30.0毫克置10.0毫升量瓶中，以50％丙酮溶液溶解並稀釋至刻度，混勻，經0.45微米微孔濾膜濾過，即得。
2.參照物溶液製備
以銀杏內酯B對照品適量，加50％丙酮溶液製成每1毫升含1毫克的溶液，即得。
3.測定方法照高效液相色譜法（中國藥典2000版一部附錄VID）測定。
4.色譜條件與系統適應性試驗
以十八烷基鍵合矽膠為填充劑（HypersilC185微米250×4.6毫米）；柱溫30℃；流動相A為水-甲醇-四氫呋喃（重蒸餾）（85:10:5，V/V），流動相B為水-甲醇-四氫呋喃（重蒸餾）（35:60:5，V/V）；梯度0～5分鐘，5％B；5～55分鐘，5％B～55％B；55～56分鐘，55％～100％B，100％B保持10分鐘；流速1.0毫升/分鐘；檢測波長220納米，理論塔板數以內酯B計應不低於7000。
5.測定方法吸取供試品溶液20微升注入液相色譜儀，即得。
6.指紋圖譜及技術參數
用高效液相色譜法測定，記錄時間為60分鐘。銀杏內酯的指紋圖譜見圖1，記錄2小時的指紋圖譜見圖2。經檢查空白（圖3）無干擾。
該品指紋圖譜中，有4個共有指紋峰。以銀杏內酯B的保留時間為1計，其餘共有指紋峰以相對保留時間標定，指紋圖譜中，以銀杏內酯B的峰面積為1，計算各共有指紋峰的面積比值，相對保留時間和相對峰面積技術參數見表1。
共有峰 | 相對保留時 間 | 相對峰面積 | 允許範圍 |
1 | 0.56 | 0.02 | / |
2 | 0.87 | 0.56 | ±20% |
3 | 1 | 1 | / |
4 | 1.71 | 1.0 | ±20% |
上述4個共有峰當中，共有峰1是銀杏內酯C，共有峰2是銀杏內酯A，共有峰3是銀杏內酯B，共有峰4是銀杏內酯K。
非共有峰面積：供試品的測定結果，非共有峰面積不得大於5％。
《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》銀杏內酯注射劑當中的銀杏內酯包括銀杏內酯A、B、C、K，其中銀杏內酯A、B、K的總含量不低於90％，最佳含量為96.05％，其中銀杏內酯B的含量為50％-65％，銀杏內酯A的含量為30-40％，銀杏內酯K的含量為0.5-5％。按每毫升注射劑產品計算，每毫升該發明注射劑含有總銀杏內酯2-10毫克，優選4毫克。所述總銀杏內酯當中各單體的比例為銀杏內酯A35.59％、銀杏內酯B58.39％、銀杏內酯K2.07％。
因此，該發明提供了含有上述三種銀杏內酯的藥物組合物，該組合物含有：銀杏內酯A30-40％，銀杏內酯B50％-65％，銀杏內酯K0.5-5％。
上述各組份的最佳配比是：35.59％的銀杏內酯A、58.39％的銀杏內酯B、2.07％的銀杏內酯K。
為了使製備該發明銀杏內酯注射劑的銀杏內酯原料純度達到90.0％以上，將市售或自製的銀杏內酯原料（薄層鑑別應檢查出銀杏內酯A、B、C、K）溶於溫熱（35-45攝氏度）的乙醇中，過濾，50攝氏度減壓回收部分乙醇，放置、冷卻、析晶，過濾，殘液另行處理，取析出的晶體進行檢測，如純度未達90％以上，按上述方法重複精製步驟，直至達到含量要求。
在銀杏內酯原料達到純度要求後，取樣品100克，加入冷乙醇或丙酮100毫升，攪拌，靜置，抽濾，按指紋圖譜檢測方法檢測，如銀杏內酯原料未達到指紋圖譜要求，重複上述處理步驟直至樣品達到要求。亦即銀杏內酯A、B、K及其他成分的比例範圍達到指紋圖譜要求。
該發明銀杏內酯注射劑的產品，經檢測，應當符合產品指紋圖譜標準的要求。
《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》銀杏內酯注射液產品的指紋圖譜測定標準如下：
1.供試品製備
精密量取樣品溶液5.0毫升置10.0毫升容量瓶中，加入6摩爾/升鹽酸溶液2毫升，混勻室溫放置3.5小時，離心（3000轉/分鐘）10分鐘，棄去上清液，沉澱以50％丙酮溶解，混勻，經0.45微米微孔濾膜過濾即得。
2.參照物溶液製備
以銀杏內酯B對照品適量，加50％丙酮溶液製成每1毫升含1毫克的溶液，即得。
3.測定方法及測定儀器
照高效液相色譜法（中國藥典2000版一部附錄VID）測定。
儀器：Agilent1100 Series（G1312APump、G1313AALS、G1316AColcom、G1315ADAD）；
色譜條件與系統適應性試驗：以十八烷基鍵合矽膠為填充劑，建議使用HypersilC1854.6×250毫米色譜柱；柱溫30℃；流動相A為水-甲醇-四氫呋喃（重蒸餾）（85:10:5，V/V），流動相B為水-甲醇-四氫呋喃（重蒸餾）（35:60:5，V/V），0～5分鐘，5％B；5～55分鐘，5％B～55％B；55～56分鐘，55％～100％B，100％B保持10分鐘；流速1.0毫升/分鐘，檢測波長220納米，理論塔板數以內酯B計應不低於7000。
測定方法吸取供試品溶液各20微升注入液相色譜儀分析，即得。
4.指紋圖譜及技術參數
（1）指紋圖譜
採用高效液相色譜法測定，記錄時間為60分鐘。銀杏內酯注射液的指紋圖譜見圖4，記錄2小時的指紋圖譜見圖5。經檢查空白（圖6）無干擾。
（2）共有指紋峰的標定
指紋圖譜中，應有5個共有指紋峰。以銀杏內酯B的保留時間為1計，其餘共有指紋峰以相對保留時間標定。
分別在10批註射液中均出現的色譜峰作為注射液的共有峰，以銀杏內酯B為自身參照物，計算各共有峰的相對保留時間（表2），以此作為共有指紋峰標定的依據。各批供試品的圖譜見附圖（4）、圖（5）。
/ | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 平均 |
注 射 液 | 0.56 | 0.55 | 0.56 | 0.56 | 0.56 | 0.55 | 0.56 | 0.56 | 0.56 | 0.56 | 0.56 |
0.87 | 0.87 | 0.87 | 0.86 | 0.86 | 0.87 | 0.87 | 0.86 | 0.87 | 0.87 | 0.87 | |
1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | |
1.72 | 1.72 | 1.72 | 1.72 | 1.72 | 1.72 | 1.72 | 1.71 | 1.72 | 1.72 | 1.72 | |
1.75 | 1.75 | 1.75 | 1.75 | 1.75 | 1.75 | 1.75 | 1.75 | 1.75 | 1.75 | 1.75 |
指紋圖譜中5個共有峰的相對保留時間是：0.58（1）、0.87（2）、1（3）（S）、1.72（4）、1.75（5）；這5個共有峰當中，1是銀杏內酯A，2是銀杏內酯A，3是銀杏內酯B，5是銀杏內酯K，而相對保留時間為1.72的峰是銀杏內酯A轉化物。
（3）共有指紋峰面積的比值
指紋圖譜中，以銀杏內酯B的峰面積為1，計算各共有峰的面積比值應符合銀杏內酯注射液指紋圖譜技術參數的規定（見表3）。
共有峰 | 相對保留時間 | 相對峰面積 | 允許範圍 |
1 | 0.58 | 0.03 | / |
2 | 0.87 | 0.53 | ±25% |
3 | 1 | 1 | / |
4 | 1.72 | 0.25 | / |
5 | 1.75 | 4.75 | ±20% |
指紋圖譜中5個共有峰的峰面積比值是：0.03（1）、0.53±25％（2）、1（3）（S）、0.25（4）、4.75±20％（5）；（4）非共有峰面積；供試品的測定結果，非共有峰面積不得大於5％。
《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》銀杏內酯注射劑所含的銀杏內酯K是發明人新發現的一種化合物，該化合物已另案申請專利，其提取分離方法如下：取銀杏內酯粗品3克置索氏提取器中，加乙酸乙酯（或丙酮）2500毫升回流24小時，回收乙酸乙酯至浸膏狀，用硅藻土拌樣，烘乾，研細，用石油醚:乙酸乙酯/9:1濕法裝於低壓矽膠柱（壓力0.2-0.3千克力/平方厘米），以石油醚:乙酸乙酯梯度遞增洗脫，當石油醚:乙酸乙酯/6:4時，97～121流分，經TCL檢查（甲苯:乙酸乙酯:丙酮:甲醇/5:2.5:2.5:0.3，4％NaAc矽膠H板）出現銀杏內酯斑點（與銀杏內酯對照品比較），將其合併濃縮，放置出現沉澱，母液留用。將沉澱以丙酮溶解，以製備型高效液相純化，可得銀杏內酯K。122～127流分經薄層檢查（條件同上）斑點相同，將其合併，濃縮，放置，析出白色針晶，過濾得白色針晶，TCL檢查與銀杏內酯A對照品Rf值（0.64）一致，乙醇重結晶得銀杏內酯A純品（GA）。將所得母液與上述留用母液合併，濃縮後用少量矽膠拌樣，烘乾，研細，用氯仿濕法裝入矽膠柱（100-140目矽膠），氯仿:丙桐/9:1洗脫，得5-10流分，TCL檢查（條件同上）後斑點Rf值相同，合併，濃縮至小體積，放置得菊花狀結晶（Rf值0.62）經乙醇多次重結晶得無色棱形結晶，用銀杏內酯B為對照品，經TCL檢查與銀杏內酯B的Rf值相同，初步確定為銀杏內酯B（GB）。柱層析繼續洗脫至15-22流分，TCL檢查斑點相同，合併，濃縮，放置得白色針狀結晶，經TLC用銀杏內酯C對照品檢查，Rf值相同，初步確定為銀杏內酯C（GC）。
銀杏內酯K的確證：白色針晶（MeoH），mp＞300℃（分解），易溶於醇、丙酮、微溶於水。略顯淡黃色（空氣中放置漸變為白色）。
IRVmax（cm）：3500，3385，3130，2960，2915，2857，1783，1757，1700，1600，1465，1437，1400，1376，1368，1356，1340，1305，1280，1260，1243，1231，1215，1183，1174，1150，1124，1110，1087，1063，1037，1021，957，750；ECI-MS（m/z）：405[M-H]。
該化合物通過理化分析和近代波譜技術（C-H相關、H-H相關、HMQC和HMBC譜）對化合物的碳氫信號進行全歸屬，結果如下。
位置 | C-NMR | H-NMR | HMBC |
1 | 84.00 | 4.80（dd） | 5.11（1-OH），5.47（6）5.53（2） |
2 | 80.20 | 6.53（dd） | 4.83（1），5.28（1-OH） |
3 | 160.33 | - | 2.90（16），5.53（2） |
4 | 90.50 | - | 6.06（12） |
5 | 76.39 | - | 2.19（7），3.83（1），5.00（10） |
6 | 88.91 | 6.47（d） | 2.19（7），3.83（1） |
7 | 35.61 | 2.20 | - |
8 | 50.83 | 1.87 | 2.87（8） |
9 | 69.17 | - | - |
10 | 69.05 | 6.00（d） | 7.18（10-OH） |
11 | 74.11 | - | 5.00（10），6.06（12） |
12 | 90.58 | 6.01（S） | 1.87（8） |
13 | 69.18 | - | 5.47（6） |
14 | 25.14 | - | 1.91（16），5.53（2） |
15 | 173.4 | - | 31.91（16） |
16 | 18.83 | 1.91（d） | - |
17 | 31.97 | - | 1.05（18-20） |
18-20 | 30.81 | - | 1.87（8） |
註：C-NMR、H-NMR、HMBC分別指核磁共振碳譜、核磁共振氫譜、二維C-H遠程相關譜。
根據上述波譜特徵確定其化學結構式如下：
《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》銀杏內酯K的化學名稱為：1，10-二羥基-3，14-二去氫銀杏內酯（1，10-Dihydroxy-3，14-didehydroginkgolide）。分子式C20H22O9，分子量為406。
《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》的銀杏內酯注射劑具有很好的藥理活性，其藥理實驗研究結果如下：
1、銀杏內酯的一般藥理學研究
（1）銀杏內酯注射液25、50、100毫克/千克尾靜脈注射對小鼠行為和協調運動均無明顯影響，對閾下劑量的戊巴比妥鈉亦無協同作用，表明該藥三個劑量對小鼠精神神經系統無明顯副作用。
（2）銀杏內酯注射液5、10、20毫克/千克靜注給藥對麻醉犬的血壓、心率、心電、呼吸頻率和幅度均無明顯影響，表明該藥三個劑量對麻醉犬心血管系統和呼吸系統無明顯副作用。
2、銀杏內酯的藥效學研究
（1）銀杏內酯注射液7.5、15.0、30.0毫克/千克iV能使MCAO大鼠的腦卒中評分降低，MCAO梗塞範圍縮小，腦組織含水量減少（P＜0.01），其作用強度與金鈉多注射液比較無明顯差異。
（2）銀杏內酯注射液7.5、15.0、30.0毫克/千克iV可使局灶性腦缺血大鼠再灌注損傷的腦組織內的MDA，LA等含量降低（P＜0.01），表明腦組織缺血缺氧和過氧化程度受到明顯抑制；同時SOD和GSH含量增加（P＜0.01），反映了藥物對機體抗氧化能力和清除自由基的能力有提高。
（3）銀杏內酯注射液7.5、15.0、30.0毫克/千克iV可明顯保護局灶性腦缺血大鼠再灌注損傷的腦組織結構，大腦皮質錐體細胞和腦實質神經細胞的核固縮、核溶解程度比缺血對照組明顯減輕，軟化灶減少。
（4）銀杏內酯注射液7.5、15.0、30.0毫克/千克iV與模型組相比可使瀰漫性全腦缺血大鼠的EEG恢復正常時間和翻正反射恢復時間明顯縮短（P＜0.01），使伊文思藍通透性顯著降低（P＜0.01），其作用與金鈉多注射液比較無統計學顯著性差異。
（5）銀杏內酯注射液能夠明顯增加急性不完全性腦缺血小鼠的存活數。按Bliss法計算銀杏內酯注射液iV的ED50為21.3（17.6-25.6）毫克/千克；銀杏內酯ig的ED50為29.2（16.5-51.7）毫克/千克；金納多iV的ED50以銀杏提取物計為12.2（6.3-23.3）毫克/千克，ED50值經t檢驗組間比較無差異。
（6）銀杏內酯注射液iV10分鐘即開始起效，達峰時間20分鐘左右，持續時間可達90分鐘以上；而該藥ig起效時間20-30分鐘，達峰時間45分鐘左右，持續時間可達120分鐘以上。同一劑量組iV的效應強於ig。
（7）銀杏內酯注射液12.0、24.0、48.0毫克/千克iV可顯著延長小鼠在缺氧狀態下的存活時間（P＜0.01）。
（8）銀杏內酯注射液2.5、5.0、10.0毫克/千克iV對麻醉犬CBF、CVR、SBP、DBP、MBP和HR均無明顯影響（P＞0.05），表明該藥三個劑量不影響麻醉犬的腦血流量、腦血管阻力、血壓和心率。
（9）銀杏內酯注射液0.99、1.96、3.80微克/毫升對PAF誘導家兔體外血小板聚集均有明顯抑制作用（P＜0.01），並有明顯解聚作用（P＜0.01）。對ADP誘導血小板聚集作用較弱（P＜0.05或P＜0.01），無明顯解聚作用（P＞0.05）。該藥iV0.75、1.50、3.0毫克/千克對PAF誘導的家兔體內血小板聚集均有明顯抑制作用（P＜0.01），中、高劑量組還有明顯解聚作用（P＜0.01）。對兔血小板數無明顯作用（P＞0.05）。
（10）銀杏內酯注射液iV1.50、3.0毫克/千克可明顯降低兔紅細胞壓積（P＜0.01）和全血粘度（比）尤其對高切變速率的全血粘度（比）作用更明顯（P＜0.01）。
（11）銀杏內酯注射液iv0.75、1.50、3.0毫克/千克能明顯抑制兔動——靜脈旁路的血栓形成（P＜0.01）。
（12）銀杏內酯注射液iv3、6、12毫克/千克對大鼠動——靜脈旁路血栓有明顯溶栓作用（P＜0.01）。
（13）銀杏內酯注射液iv6、12、24毫克/千克能明顯延長小鼠凝血時間（P＜0.01）。
（14）銀杏內酯注射液iv6毫克/千克後10分鐘-20分鐘時可明顯延長大鼠凝血時間，峰時12分鐘左右，可使大鼠凝血時間延長32％左右，ig50毫克/千克後45分鐘有效，持續120毫米，峰時69分鐘左右，大鼠凝血時間延長34％左右。
（15）銀杏內酯注射液iv1.5毫克/千克藥後立即就可明顯抑制PAF誘導免體內血小板聚集並有明顯解聚作用（P＜0.01），作用持續30分鐘，其峰時為5分鐘，血小板聚集抑制率可達80％左右，1分鐘解聚為81％左右。銀杏內酯ig25毫克/千克藥後30分鐘可明顯抑制PAF誘導兔體內血小板聚集並有明顯解聚作用（P＜0.01），持續60分鐘，其峰時為42分鐘左右，血小板最大聚集抑制率為38％左右，1分鐘解聚率為32％左右。
（16）銀杏內酯注射液iV延長小鼠凝血時間的IC50為6.42毫克/千克，銀杏內酯ig延長小鼠凝血時間的IC50為29.41毫克/千克。銀杏內酯注射液iv對家兔血小板和PAF誘導體內血小板聚集的IC50為2.32毫克/千克，銀杏內酯ig對家兔血小板和PAF誘導體內血小板聚集的IC50為87.72毫克/千克。
上述實驗表明，《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》的銀杏內酯注射液安全有效，可用於缺血性中風的預防和臨床治療。
改善效果
《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》銀杏內酯注射液的優點是產品質量穩定可控，根據注射劑產品的指紋圖譜，能夠控制產品的組成，特別是增加了銀杏內酯K這一控制指標，配合其他銀杏內酯A、B、C等指標，使得產品的穩定更加可控。
該發明銀杏內酯注射劑具有較好的穩定性和很好的療效，還因為該發明銀杏內酯注射劑的製備工藝過程，助溶劑的選擇對製劑的製備和穩定性有重要的影響，該發明研究過程中，系統的考察了（1）丙二醇、PEG400、乙醇，（2）丙二醇、PVP、乙醇，（3）丙二醇、山梨醇、乙醇，（4）葡甲胺，（5）葡甲胺、葡萄糖，（6）尿素，（7）丙二醇、吐溫-80、乙醇，（8）丙二醇、乙醇，（9）氫氧化鈉，（10）PluronicF-68，（11）PluronicF-68、丙二醇，（12）豆磷脂、PluronicF-68、丙二醇、甘油、PEG400、乙醇，（13）HP-βCD，（14）丙二醇、PEG400、磷酸鹽緩衝液，（15）丙二醇、PEG400、磷酸鹽溶液等多種助溶劑。通過大量的試驗，發現上述藥用輔料均有助溶作用，其中以葡甲胺效果最佳。該助溶劑對銀杏內酯其他組分的組合（例如：銀杏內酯A、B，銀杏內酯A、B、C，銀杏內酯B、K，銀杏內酯A、B、C、K，銀杏內酯B、C、K、銀杏內酯A、C等）均具有良好的助溶作用。
附圖說明
圖1銀杏內酯指紋圖譜；
圖2銀杏內酯記錄2小時指紋圖譜；
圖3銀杏內酯指紋圖譜空白；
圖4是銀杏內酯注射液指紋圖譜；
圖5銀杏內酯注射液記錄2小時指紋圖譜；
圖6銀杏內酯注射液指紋圖譜空白。
權利要求
1、一種銀杏內酯注射劑，其特徵在於該注射劑中各組份及其重量比是：銀杏內酯:葡甲胺:氯化鈉=2-8:2-8:4-12。
2、根據權利要求1所述的銀杏內酯注射劑，其特徵在於該注射劑的各組份重量比是：銀杏內酯:葡甲胺:氯化鈉=4一6:4—6:6—10。
3、根據權利要求2所述的銀杏內酯注射劑，其特徵在於該注射劑的各組份重量比是：銀杏內酯:葡甲胺:氯化鈉=5:5:8。
4、根據權利要求3所述的銀杏內酯注射劑，其特徵在於該注射劑的組份當中還加入10%檸檬酸溶液。
5、一種銀杏內酯注射劑的製備方法，其特徵在於該注射劑的組分和製備方法如下：銀杏內酯5.0克、葡甲胺5.0克、NaCl8.0克、10％檸檬酸溶液適量。
取葡甲胺加新鮮注射用水1000毫升溶解，於120°C高壓滅菌30分鐘，取出後於配料室加熱至80。（2，加入研細過80目篩的銀杏內酯，加熱至溶解，冷卻至室溫後用10%的檸檬酸水溶液調pH至8.0，加入NaCl8.0克，針用活性炭2.0克，室溫攪拌吸附30分鐘，過濾除炭，加新鮮注射用水至總量1000毫升，於無菌車間用無菌濾板下襯0.22微米微孔濾膜過濾，分裝。
實施方式
處方：銀杏內酯5.0克、葡甲胺5.0克、NaCl8.0克、10％檸檬酸溶液適量。
製法：取葡甲胺加新鮮注射用水1000毫升溶解，於120℃高壓滅菌30分鐘，取出後於一萬級配料室加熱至80℃，加入研細過80目篩的銀杏內酯（銀杏內酯符合《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》所述的質量標準），加熱至溶解，冷卻至室溫後用10％的檸檬酸水溶液調pH至8.0，加入NaCl8.0克，針用活性炭2.0克，室溫攪拌吸附30分鐘，過濾除炭，加新鮮注射用水至總量1000毫升，於100級無菌車間用無菌濾板下襯0.22微米微孔濾膜過濾，分裝於10毫升安瓿熔封，質檢，印字，包裝。
該產品為銀杏內酯的滅菌水溶液。每毫升含銀杏內酯A、B、K總量不得低於4.0毫克。
榮譽表彰
2017年5月12日，《含有銀杏內酯的製劑及其製備工藝》獲得第十屆江蘇省專利項目優秀獎。
