一種銀杏內酯的藥物組合物:專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,附圖說

《一種銀杏內酯的藥物組合物》是孫毅於2006年7月26日申請的專利，該專利的申請號為2006101036260，公布號為CN1887283，授權公布日為2007年1月3日，發明人是孫毅。

《一種銀杏內酯的藥物組合物》公開了一種含銀杏內酯注射液。這種注射液中各成份及各成份的比例與所投的銀杏內酯提取物是一致的。而且與銀杏葉中的成份具高度相關性並且能在很長時間內保持穩定。能夠最大限度地發揮白果內酯促進神經生長的作用，以及防止腦、脊髓神經脫髓鞘作用，防止老年性痴呆的發生和發展的作用。

2016年12月7日，《一種銀杏內酯的藥物組合物》獲得第十八屆中國專利優秀獎。

基本介紹

中文名：一種銀杏內酯的藥物組合物
公布號：CN1887283
授權日：2007年1月3日
申請號：2006101036260
申請日：2006年7月26日
申請人：孫毅
地址：四川省成都市高新區高朋大道3號A座310
發明人：孫毅
Int.Cl.：A61K31/365(2006.01)；A61K9/08(2006.01)；A61K9/107(2006.01)；A61K9/20(2006.01)；A61K9/22(2006.01)等
類別：發明專利

專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,附圖說明,技術領域,權利要求,實施方式,榮譽表彰,

專利背景

銀杏內酯是從中草藥銀杏葉當中提取獲得的有效物質，銀杏內酯是二萜烯類化合物，是包括1個四氫呋喃環、3個r-內酯基和由2個戊碳環連結在1個碳原子上形成的螺[4，4]壬烷系統，共6個戊碳環與叔丁基相結合的獨特的C20籠蔽分子。其順式稠環F、A、D與C被塑造成半球形的空腔，這個空腔是足以容納1個陽離子或陽性極化的有機分子。

P.Braquet等（1988）報導已知的銀杏內酯有5種，用A、B、C、M、J命名（GinkgolidesA、B、C、M、J），銀杏內酯的基本結構是共同的，不同的銀杏內酯之間的差別僅是羥基的數目與位置的不同。銀杏內酯M與J，實際上是銀杏內酯B的同分異構物。銀杏內酯A.B.C既存在於銀杏根皮內，也存在於銀杏葉內，銀杏內酯M僅存在於根皮內；銀杏內酯J發現較晚，僅存在於銀杏葉內。銀杏內酯的化學性質不活潑，是極為穩定的。

對於銀杏內酯的提取方法已經有詳細的文獻報導，例如，李新崗等人介紹了銀杏內酯的實驗室提取方法（參加李新崗等，銀杏葉中銀杏內酯的實驗室提取方法研究，中國醫藥工業雜誌1998第1期），中國專利文獻CN1195665A介紹了銀杏內酯的提取方法和含有銀杏內酯的製劑，該方法是將銀杏葉用水煮沸提取，用吸附劑對提取濾液吸附，再用乙醇脫附，回收乙醇，將析出的結晶溶解，重結晶，乾燥製得銀杏內酯。中國專利文獻CN1313287A公開了一種銀杏內酯的生產工藝。從銀杏內酯的總提取物當中分離銀杏內酯單體的方法，也有很多相關的文獻報導，例如，游松等人介紹了銀杏內酯中銀杏內酯的分離與結構測定方法（參見游松等，銀杏葉中銀杏內酯的分離與結構測定，中國藥物化學雜誌1995年第4期）。中國專利文獻CN1287121A公開了由銀杏葉或銀杏葉浸膏製備藥物銀杏內酯A、B的方法。銀杏內酯作為一個有效的活性物質，可以將其製備成不同的臨床藥物劑型。劉潔等使用銀杏葉注射劑治療急性腦梗塞取得了一定療效[參見劉潔等，銀杏葉注射液對急性腦梗塞後肢體運動功能及TXB-2、6-Keto-PGF-（la）的影響]。關於銀杏內酯的藥理作用，已經有較為詳細的文獻報導（參見陳維軍等，銀杏內酯的化學結構及藥理作用研究進展，中國藥學雜誌1998年第9期）。儘管2006年7月前技術當中對於銀杏內酯及其製劑的研究已經有很多的報導，但是，對於銀杏內酯的研究一直沒有停止，特別是對於銀杏內酯單體的分離及其衍生物的研究，不斷有文獻報導。截至2006年7月，對於銀杏內酯當中有效單體的研究，已經報導了銀杏內酯A、B、C等結構，將銀杏內酯製備成注射劑，很重要一項技術問題是如何解決其難溶解性，銀杏內酯注射劑製備過程當中，對於助溶劑的選擇也非常重要，這直接影響到產品的穩定性和臨床療效。

根據銀杏內酯的內酯環結構，一般很容易想到用酸或鹼使開環，或者用有機溶劑溶解，但是它在一般的有機溶劑中溶解性也很差，如乙醇，聚乙二醇400，甘油，丙二醇中溶解度都很小。所以，截至2006年7月，銀杏內酯製備注射劑的方法有通過使用鹼溶液增加銀杏內酯的溶解性而製得，例如CN200510040497.0，CN00115134.7，CN02134223.7。加入葡甲胺的情況下，對銀杏內酯有很好的助溶作用例如CN02128962.X。對銀杏內酯採用羥丙基-β-環糊精增溶製得的水溶液例如CN200510072466.3，CN200410013937.9，CN200410041120.2。另外，CN03100334.6公開針劑中含有5-99％銀杏葉提取物、1-95％泊洛沙姆188和pH值調節劑以及其它賦形劑。CN03137720.3一種銀杏內酯B針劑的製備方法，將銀杏內酯B原料溶解於注射用非水溶劑聚乙二醇中，聚乙二醇可單獨使用或與無水乙醇配成混合溶劑，按體積計，聚乙二醇:乙醇＝0.5:0.5～0.9。

這些方法中，加羥丙基-β-環糊精，泊洛沙姆，聚乙二醇等試劑，其作為注射液的安全性值得商榷。羥丙基-β-環糊精具有潛在的腎毒性，截至2006年7月，僅用抗真菌藥伏力康唑注射液中，在中國沒有作為合法的注射用附加劑。泊洛沙姆因為安全性問題在中國也沒有作為合法的注射用附加劑。聚乙二醇濃度較大時有溶血的危險。所以基本無實用的可能。加鹼或加葡甲胺都屬於讓內酯開環成鹽，在中性或酸性條件下，很難形成有藥效形式的內酯原形，甚至沒有白果內酯。而白果內酯是銀杏中最受關注的化學成分，動物試驗報導，白果內酯具有促進神經生長的作用，以及防止腦、脊髓神經脫髓鞘作用，其神經營養、神經保護作用比銀杏內酯強。近年來還發現白果內酯可防止腦細胞線粒體氧化應激引起的功能改變，選種抗氧化應激對改善老年記憶功能，防止老年性痴呆的發生和發展起到有益的作用，因此國際上對銀杏提取物的要求（德國衛生部CommissionE制訂的規格）是，白果內酯含量應為2.6-3.2％。

為了解決有效性問題。《一種銀杏內酯的藥物組合物》公開了一種銀杏內酯注射液的處方，能使所投的銀杏內酯原料與銀杏內酯注射液，各組份和比例保持不變。並且與銀杏葉中的組份比例接近。

銀杏內酯A18％-36％、銀杏內酯B10％-29％、銀杏內酯C15％-24％、白果內酯12％-57％。平均為26％，18％，19％，36％。（參見唐紅芳等的銀杏葉中銀杏萜內酯的GC-MS定性定量分析，中草藥，第34卷第3期2003年3月）

發明內容

專利目的

《一種銀杏內酯的藥物組合物》的目的是提供一種含有銀杏內酯的製劑，特別是銀杏內酯注射液，同時還提供該注射液的製備工藝。

技術方案

《一種銀杏內酯的藥物組合物》所述的銀杏內酯的製劑是以高純度的銀杏內酯為有效成份製備而成，銀杏內酯A，銀杏內酯B，銀杏內酯C，白果內酯之和大於總提取物的80％以上（重量比）。

《一種銀杏內酯的藥物組合物》的注射液的各組成部分的重量比為：銀杏內酯:乙醇:甘油:水＝（0.05％~1.5％）:（20％~70％）:（10％~40％）:（20％~70％）。

上述組份的優選重量比為：銀杏內酯:乙醇:甘油:水＝（0.2％~0.7％）:（30％~50％）:（10％~30％）:（30％~50％）。

其中還需加入適量的10％檸檬酸溶液調節pH值。

製劑處方：處方（以1000劑量單位計）：銀杏內酯10克、甘油400毫升、乙醇800毫升、注射用水加至2000毫升、製成1000支。

製備方法：取處方量約80％的注射用水，處方全量的甘油和乙醇，置配液缸中，加入處方量的銀杏內酯，攪拌溶解後，加注射用水至全量，用10％檸檬酸溶液調節pH，攪勻，半成品檢驗合格後，用0.65微米和0.45微米複合耐醇微孔濾膜作濾材的微膜過濾系統過濾澄明，灌封於2毫升玻瓶中，於100℃滅菌20分鐘，冷卻，燈檢，貼標，即得。

製備《一種銀杏內酯的藥物組合物》銀杏內酯杏內酯注射液所使用的銀杏內酯原料，可以通過已知的提取方法提取，或者通過市售購得，但是銀杏內酯A、B、C和白果內酯的比例應該與銀杏葉中的比例大體一致。

銀杏內酯B10％~90％；白果內酯10％~90％（重量比）

更優選：銀杏內酯A:銀杏內酯B:銀杏內酯C:白果內酯為（10％~45％）:（5％~40％）:（3％~35％）:（10％~70％）。

更優選：銀杏內酯A:銀杏內酯B:銀杏內酯C:白果內酯為（15％~40％）:（7％~30％）:（5％~20％）:（20％~60％）。

含量測定用高效液相色譜一蒸發光散射檢測法（HPLC-ELSD）直接測定銀杏葉中銀杏萜類內酯A、B、C及白果內酯的含量。方法：10％甲醇製作供試品溶液，經C18色譜柱，以甲醇一水為流動相。梯度洗脫，以蒸發光檢測器檢測。（參見顏玉貞，謝培山HPLC-ELSD法測定銀杏葉中的4種萜類內酯含量《藥物分析雜誌》：2001年21卷3期173-176頁）。

從所投料的銀杏內酯原料和所得成品的HPLC圖譜上可見：銀杏內酯A、B、C及白果內酯各成份及各成份的比例沒有變化。（見附圖1，2）

初步穩定性試驗

仿市售包裝，於室內常溫下放置（溫度8～32℃，相對濕度60％～90％），樣品於當月考察一次後，分別於1月、2月、3月、6月、12月、18月取樣按自擬的《銀杏內酯注射液質量標準（小針劑）（草案）》進行考察（其中無菌、溶血、刺激性僅在0、3和18月進行）。結果均符合規定，說明《一種銀杏內酯的藥物組合物》的銀杏內酯注射液基本穩定。

銀杏內酯注射液主要藥效學試驗資料

供試藥品

銀杏內酯注射液，銀杏內酯注射劑輔料溶液（簡稱空白溶液），燈盞花素注射液，規格：5毫克/2毫升，系雲南箇舊生物藥業有限公司產品。

1、抗血小板聚集性試驗

富血小板血漿（platelet-richplasma，PRP）和貧血小板血漿（platelet-poorplasma，PPP）的製備：取健康家兔，體重2～3千克，雌雄均用。自清醒家兔頸動脈取血收集於塑膠離心管中，以3.8％枸櫞酸鈉抗凝（血與抗凝劑體積比9:1）。室溫下900轉每分離心10分鐘，得PRP，吸出PRP於潔淨塑膠管中；剩餘血液再以3000轉每分離心10分鐘得PPP。PPP用於調零或調整PRP中的血小板數目，試驗過程中血小板數控制在5×10cell/升。

①銀杏內酯注射液在體外對血小板聚集功能的影響

將銀杏內酯注射液用空白溶液、燈盞花素注射液用生理鹽水稀釋成不同濃度的藥液備用，分別取10微升藥液或空白溶液於PRP中，37℃溫育10分鐘。按Born比濁法，即PPP調零及PRP調幅後，加入5微升的PAF（終濃度7.2納摩爾/升），在血小板聚集儀上測定血小板聚集性並記錄5分鐘內最大血小板聚集率。血小板聚集抑制率按下式計算，用直線回歸法求出藥物的半數抑制濃度（50％inhibitoryconcentration，IC₅₀）.

血小板聚集抑制率（％）＝[1-（對照管聚集百分率/給藥管聚集百分率）]×100

結果顯示，銀杏內酯注射液呈濃度依賴性明顯抑制PAF誘導的血小板聚集，其IC₅₀為9.4毫克/升，燈盞花素注射液IC₅₀為214.8毫克/升（表1，2）。表明銀杏內酯注射液抑制PAF誘導的血小板聚集，顯著強於燈盞花素注射液。

表1.銀杏內酯注射液在體外對PAF誘導的血小板聚集功能的影響

表1

n＝5，x±s，P＜0.01與空白溶液組比較（Studentt-檢驗）。

表2.燈盞花素注射液在體外對PAF誘導的血小板聚集功能的影響

表2

n＝5，x±s，P＜0.01與空白溶液組比較（Studentt-檢驗）。

2、銀杏內酯注射液在體內對血小板聚集功能的影響

健康家兔30隻，體重2.0～2.5千克，雌雄均用，隨機分成5組，每組6隻，即等體積空白溶液組、2.0、4.0、8.0毫克/千克的銀杏內酯注射液組和13.2毫克/千克的燈盞花素注射液組。上述各組份均以5.0毫升/千克體重經耳緣靜脈注射給藥。給藥前取血一次，給藥後10、30、60、90和120分鐘分別取血，同體外試驗方法製備PRP和PPP，觀察藥物靜脈注射後對PAF誘導血小板聚集功能的影響。

實驗結果表明，銀杏內酯注射液靜脈注射後，劑量為2.0毫克/千克時對PAF誘導的血小板聚集功能無明顯抑制作用，4.0毫克/千克時，於注射後30和60分鐘明顯抑制PAF引起的血小板聚集，8.0毫克/千克時，於注射後10分鐘起效，於60分鐘達最大抑制作用，抗PAF作用持續至90分鐘；13.2毫克/千克（臨床劑量的40倍）的燈盞花素注射液的作用特點與8.0毫克/千克（臨床劑量的20倍）的銀杏內酯注射液相似。注射後60分鐘，8.0毫克/千克（臨床劑量的20倍）銀杏內酯注射液的抗PAF作用強度明顯高於13.2毫克/千克（臨床劑量的40倍）燈盞花素注射液組（表3）。

表3.銀杏內酯注射液靜脈注射對PAF誘導的血小板聚集功能的影響