偽狂犬病

起源

20世紀中期，PR在東歐及巴爾幹半島的國家流行較廣，60年代之前，豬被感染後其症狀比較溫和，在養豬業中未造成重大經濟損失。然而在60一70年代，由於強毒株的出現，豬場爆發Pr的數量顯著增加，而且各種日齡的豬均可感染，其症狀明顯加劇。這種變化不僅存在於美國，在西歐各國如德國、法國、義大利、比利時、愛爾蘭等國家也同樣存在。幾年之後，此病相繼傳入紐西蘭、日本、中國的台灣及南美的一些國家和地區。偽狂犬病（英語：Pseudorabies）是發生於豬的病毒病，在世界上的大部分地區呈地方性流行。偽狂犬病由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起，也稱奧耶斯基氏病（Aujeszky's disease），發生於牛而稱“瘋癢病”（mad itch）。在完成豬瘟淨化的地區，偽狂犬病被認為是對經濟影響最大的豬病毒病[1]。包括牛、綿羊、山羊、貓、狗和浣熊等其它家畜和野生哺乳動物，都是易感動物。這一疾病在這些宿主上通常是致命的[2]。

豬的偽狂犬病已經有基因工程苗可以用於防制。偽狂犬病病毒被作為模型廣泛用於溶胞素皰疹病毒感染的基本過程和闡明皰疹病毒科親神經性分子機制的研究[3][4]。

雖然偽狂犬病（"pseudorabies"）的原意為“偽狂犬病”或“類似狂犬病”，偽狂犬病與狂犬病毒並沒有關係，而是屬於皰疹病毒。

分布

目前世界上有40多個國家都有本病報導，據不完全統計，中國已有20多個省、市流行過本病，近幾年PR在中國許多省（市）種豬場呈爆發流行趨勢。現將PR的病原、流行病學、臨床症狀、診斷、防治等作一概述。

介紹

偽狂犬病（Pseudorabies，PR又名Aujeszky's disease，AD）是由偽狂犬病毒(Pseudorabies Virus，PRV）引起的一種傳染病。該病最早發現於美國，後來由匈牙利科學家首先分離出病毒。20世紀中期，PR在東歐及巴爾幹半島的國家流行較廣， 60年代之前，豬被感染後其症狀比較溫和，在養豬業中未造成重大經濟損失。

病原

1.1 病原及其感染特點

PRV屬皰診病毒科皰疹病毒甲亞科，暫定水痘病毒屬，病毒粒子呈橢圓或圓形，無囊膜粒子直徑為110-150nm；有囊膜的成熟病毒粒子直徑180nm。囊膜表面有呈放射排列的纖突，長8-10nm，DNA分子量為87×l06。

PRV是皰疹病毒中抵抗力較強的一種。在物體表面和液體中可存活7d。在pH4-9之間保持穩定。腐敗條件下，病料中的病毒經lld失去感染力。PRV對乙醚、氯仿等脂溶劑，福馬林和紫外線照射等敏感。5%石碳酸經2min滅活，0.5%-1%氫氧化鈉使其滅活。對熱的抵抗力較強，55-60℃經30-50min才能滅活，80℃經3min滅活。

迄今為止，還沒有發現抗原性不同的PRV毒株。在病毒與宿主的相互作用中，病毒的糖蛋白起著重要作用，現已發現在PRV至少有gⅠ、gⅡ、gⅢ、gp50、gp63、gX、gH、gL、gM、gN和gK等11種糖蛋白。

1.2 感染特點

1.2.1 潛伏感染 被感染豬不表現臨床症狀，但感染性病毒卻能在豬體內長期以潛伏狀態存在，也分離不到病毒，但用聚合酶探針方法可查出病毒基因組DNA的存在，在外界不良環境刺激等造成的免疫力減弱時，潛伏狀態的病毒可轉化為具有感染性的病毒。

1.2 隱性感染 在豬群使用疫苗接種或自然感染部分少量病毒後，該豬只得到部分免疫，可發生隱性感染豬和表現為亞臨床症狀的豬，這種帶毒豬排毒可持續一年以上。

流行病學

2.1 易感動物 PRV是感染動物種類多和致病性強的一種病毒。除各種年齡的豬、牛都易感外，在自然條件下使羊、犬、貓、兔、鼠、水貂、狐等動物感染髮病。實驗動物中家兔、豚鼠、小鼠都易感。其中以家兔最敏感。

2.2 傳播形式

2.2.1 垂直傳播 PRV可通過胎盤而傳遞給子體，而母體免疫球蛋白卻不能，所以對胎兒的感染是致命的。

2.2.2 媒體傳播 帶有病毒的空氣飛沫核可隨風傳到9km或更遠的地方，使健康豬群受到感染。被污染的飼料、或帶病毒的鼠、羊等動物也可傳播。

狗狗檢測

介紹

狗傳染性腹膜炎（FIP）是目前導致狗死亡的重要原因之一，從3個月到3齡狗以及大於10齡狗，特別是發生在那些純種狗和其它數量及種類繁多但養在一起的家養狗。狗冠狀病毒FeCV(Feline enteric Coronavirus）是高度傳染性病毒而且偏好發生在數量及種類繁多而且養在一起的家養狗。FeCV給狗帶來了極大的危險，FeCV陽性通常被認為是FIP的前奏。要控制狗FIP最根本的方法就是要做好FeCV的預防和控制。FeCV是廣泛的狗冠狀病毒Feline Coronavirus (FCoV）中的一種，FeCV抗體的存在僅表示有FeCV病毒存在和/或感染了FIP的可能性。對FeCV抗體呈陽性結果也不一定表示狗得到了FeCV病毒和/或感染了FIP，應該要和其它臨床症狀結合起來一齊判斷。但陰性結果可說明沒有FeCV病毒和/或感染了FIP。

檢測原理

酶標板的孔中包被有純化的冠狀病毒抗原。從金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus提取的蛋白A與HRP結合成複合物。血清或血漿樣品和蛋白A酶標記物一起在酶標板的孔中孵育。如果貓樣品里存在FCoV抗體，抗體將與孔中的抗原結合，再與蛋白A酶標記物結合。多餘的酶標記蛋白A被洗掉，加入發色底物。清晰的藍色表示FCoV抗體存在，沒有顏色變化表明沒有FCoV抗體。

該試劑盒具有高特異性和靈敏度，操作簡單，30分鐘內可以知道結果。試劑盒裡包括陽性質控和陰性質控，僅需肉眼通過與陰性質控顏色進行比較，就可以準確地判斷樣品里FCoV抗體的存在。

樣品

需1ul血清或血漿，只能檢測貓的樣品。樣品可在2-8C保存7天，如果需要更長的保存，樣品可保存在-20C。嚴重紅細胞溶解或脂溶血會產生干擾的顏色，所以儘可能去得到更好質量的樣品。

準備洗滌液

讓洗滌濃縮液達到室溫，輕輕地倒置混勻。用蒸餾水或去離子水稀釋洗滌濃縮液（1份洗滌濃縮液加至9份水中），稀釋後的洗滌液可保存於2-7C。

結果

a. 檢測的有效性必須是：陽性質控孔里的液體呈清晰的藍色，而陰性質控孔里的液體保持清澈。

b. 假若樣品孔的顏色變化比陰性質控孔深很多則表明，該動物以前或目前正受到FCoV感染，並且有可能通過排泄物傳播病毒。此時便需要與其它的臨床數據結合起來以確診FIP。

c. 如果樣品孔里無顏色變化表明沒有感染FIP疾病。

試劑盒組份

以下內容物包含在試劑盒裡：

包被好的酶標板 8x12孔

陽性質控血清 1.5ml

陰性質控血清 7.0ml

蛋白A HRP標記物 5.0ml

TMB 7.0ml

底物緩衝液 7.0ml

濃縮洗滌液 100.0ml

注意事項

* 試劑盒使用前恢復至室溫（21-25C）

* 不同樣品使用不同的加樣器頭

* 不要把試劑盒直接暴露在陽光下

* 不要使用過期的試劑或不同試劑盒裡試劑一齊混雜使用

* 嚴格按照步驟操作，不適當的洗滌或試劑污染將產生非專一性的顏色

* 僅限獸醫使用

保存和穩定性

將試劑盒和稀釋的洗滌液保存於2-7C，不要冷凍。只要在適當保存條件下，試劑在有效期內是穩定的。

物種

在美國，通常由野豬（Sus scrofa）接觸並傳播病毒。仔豬的死亡率最高。懷孕母豬感染疾病後經常會流產。另外健康的成年公豬通常是潛在的攜帶者，它們會攜帶並傳播病毒且不會表現出症狀或突然不能使用[10]。

豬（包括家豬和野豬）通常是這一病毒的貯存宿主。雖然病毒也會感染其它物種，但通常死亡率高。偽狂犬病在包括美洲黑熊、佛羅里達山豹、浣熊、郊狼以及白尾鹿在內的其它哺乳動物發生的情況也有報導。在多數病例中均為或疑似與豬或豬產品接觸有關。歐洲在馴養的毛皮類動物（貂或狐狸）暴發疾病與飼養病豬製成的產品有關。一些其它的物種可以通過試驗感染。人類並非潛在的宿主[11]。

傳播

偽狂犬病為高傳染性。在大多數病例中，疾病通過鼻與鼻接觸傳播。由於偽狂犬病大量存在於鼻腔和口腔區域，鼻與鼻接觸是最常見的傳播類型。

臨床症狀

病豬的臨床症狀和病程隨年齡不同而有很大差異。哺乳仔豬最為敏感，15日齡以內的仔豬常表現為最急性型，病程不超過72h，死亡率100%，主要表現為體溫升高、拉稀、發抖、運動不協調、流涎、頸部肌肉僵硬、四肢划水樣運動，最後昏迷死亡。育肥豬則大多數伴有體溫升高，呼吸困難，一般不發生死亡，耐過後呈長朗隱性感染帶毒或排毒。成年豬常不呈現可見臨床症狀或僅表現為輕微體溫升高，一般不發生死亡。母豬妊娠初期，可在感染後的20天左右發生流產，在妊娠後期，經常發生死胎和木乃伊，或者產出弱胎和死胎。

豬偽狂犬病表現有四大症狀：

（1）妊娠母豬發生流產、產死胎、木乃伊胎，其中以產死胎為主。

（2）偽狂犬病引起新生仔豬大量死亡，主要表現在剛生下的仔豬第1天還很好，從第2天開始發病，3～5天內是死亡高峰期，有的整窩死亡。死亡初生仔豬的日齡已觀察到19日齡。發病仔豬表現出高熱、食慾廢絕、明顯的神經症狀、昏睡、嗚叫、流涎、嘔吐、拉稀、抑鬱震顫，繼而出現運動失調、間歇性抽搐、昏迷以至衰竭死亡，一旦發病，1～2天內死亡。15日齡以內仔豬死亡率可高達100%。剖檢主要是腎臟布滿針尖樣出血點，有時見到肺水腫、腦膜表面充血、出血。

（3）偽狂犬病病毒引起斷奶仔豬發病死亡，發病率在20%～40%，死亡率10%～20%，主要表現為神經症狀、拉稀、嘔吐等。

（4）種豬不育症。母豬不發情、配不上種，返情率高達90%，有反覆配種數次都屢配不上，耽誤了整個配種期。此外公豬感染偽狂犬病病毒後，表現不育、睪丸腫脹，萎縮，喪失種用能力。成年豬僅表現增重減慢等輕微溫和症狀。

2．綜合防制

目前尚無治療辦法，但高免血清被動免疫適用於最初感染豬群中的哺乳仔豬，母豬的抗體通過初乳傳給仔豬，母體源體可持續大約4～6周。母體被動免疫可以保護仔豬的致命感染。已發病或檢查出偽狂犬病病毒感染陽性的豬場，建議所有的豬都應進行免疫。

（1）滅活疫苗 種豬（包括公豬）第1次注射後，間隔4～6周后加強免疫一次，以後每6個月注射一次，產前一個月左右加強免疫一次，可獲得非常好的免疫效果，能將哺乳仔豬保護到斷奶。留作種用的斷奶仔豬在斷奶時注射一次，間隔4～6周后，加強免疫一次，以後按種豬免疫程式進行。育肥用的斷奶仔豬在斷奶時注射一次，直到出欄。

（2）弱毒疫苗 種豬第1次注射後，間隔4～6周加強免疫一次，以後每隔4個月注射一次。育肥豬斷奶時注射一次，直到出欄。

診斷

4.1 病毒分離和鑑定 採取腦組織、扁桃體，用PBS製成10%懸液或鼻咽洗液接種豬、牛腎細胞或雞胚成纖維細胞，於18-96h出現病變，有病變的細胞用H·E染色，鏡檢可看到嗜酸性核內包涵體。

4.2 兔體接種試驗 上述懸液經2000r/min離心1Omin，取上清液1~2ml經腹側皮下或肌肉接種家兔，通常在36-48h後注射部位出現劇癢，病兔啃咬注射部位皮膚，皮膚脫毛、破皮和出血，繼之四肢麻痹，體溫下降，臥地不起，最后角弓反張，抽搐死亡。

4.3 血清學診斷

4.3.1 中和試驗（NT) NT有較高靈敏度，是一種常用的診斷方法。將標準病毒株與連續倍比稀釋的等量血清混勻後，37℃中和lh，接種在96孔微量培養板上的單層豬腎繼代細胞（PK-l5）或雞胚成纖維細胞，置37℃，5%CO2培養觀察CPE，以能完全中和試驗病毒的血清最高稀釋度的倒數為該血清的中和效價，中和效價大於或等於1:2的判為陽性。

4.3.2 酶聯免疫吸附試驗（ELISA) 程由銓等套用單克隆抗體介導的固相微球直接ELISA檢測感染，小白鼠額下腺、耳下腺混合物、肝、脾、肺、腎等材料，PRV的陽性檢出率為98%。黃駿明等用過氧化物酶標記的葡萄球菌蛋白A建立的Dot-ELISA對豬血清PRV抗體具有特異強、靈敏度高的優點，與血清中和試驗比較，Dot-ELISA陽性檢出率為28.19%（53/188）、NT陽性檢出率為20.74%（39/188）。

4.3.3 免疫螢光抗體試驗（FA) 程由銓等[10]建立了檢測病料組織中PRV間接螢光抗體試驗，並和病毒分離（VI）作了比較，對肺和扁桃體中PRV抗原檢出率分別為FA86%和92%，V194%和88%。黃駿明等建立了直接FA技術檢測PRV，對病豬活體取鼻咽試子塗片，對病死豬取扁桃體、三叉神經節、腦、脊髓和鼻黏膜塗片，檢出率高達95%以上。

4.3.4 核酸探針檢測技術 郭萬栓等用斑點雜交法套用32P標記PRV全基因組DNA和重組質粒作探針檢測細胞培養物中的PRV一DNA，均能檢測lOpg的PRV一DNA，且有較高特異性。魏偉等用光敏生物素標記PRV特異性糖蛋白GP50克隆重組顆粒PUP作為探針，檢測實驗感染乳豬15頭份，證明通過PCR和分子克隆技術製備的PRV特異性糖蛋白基因片段的光敏生物探針，能有效地用於檢測偽狂犬病。

4.3.5 PCR技術 冉多良等，石建平等，周復春等，冉智光等先後套用PCR技術對PRV進行基因擴增，均獲得了特異敏感的結果。

防治

目前尚無治療PR的有效藥物。對PRV控制除常規隔離、消毒、控制人員流動以外，疫苗接種是防止PR發生流行的重要措施。Lens[3]報導用DNA重組技術研製的低毒力PR疫苗進行田間免疫，安全有效，套用該疫苗接種的豬再發生接獨感染。目前國內主要套用滅活苗和弱毒苗預防PR，具有良好的免疫效果。滅活苗和弱毒苗只能降低接種豬的發病率和死亡率，但不能阻止帶毒豬排毒。PR一旦傳入豬場就很難根除，在發生過PR的豬場，停止使用疫苗後又會引起本病的發生。因此，在疫區進行疫苗接種外，非疫區應加強對引進豬的檢疫，隔離飼養，搞好圈舍衛生，從而控制該病的發生和傳播。