《人類長壽基因SIRT1在皮膚光老化中的作用及機制研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由田燕擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：人類長壽基因SIRT1在皮膚光老化中的作用及機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：田燕
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
本課題組在既往的研究中發現小劑量UVA多次照射可使人體皮膚發生典型的光老化改變- - 基質金屬蛋白酶(MMPs) 增高所致的纖維結締組織降解，並上調沉默信息調節蛋白（SIRT1）的表達；皮膚細胞學實驗也得到類似的結果並縮短了染色體末端的端粒長度。SIRT1是新近發現的一種控制生物體壽命的長壽基因，其是否參與了皮膚光老化的進程及調控機制不明。本研究擬在前期人體實驗的基礎上，構建SIRT1的siRNA表達載體，轉染UVA誘導老化的皮膚細胞抑制SIRT1表達，同時以激活劑白藜蘆醇促進SIRT1的表達後分別觀察細胞衰老特徵的改變，揭示SIRT1在皮膚光老化中的功能。同時檢測SIRT1對MMPs和p53表達信號轉導通路的調控，以及對染色體末端端粒長度的影響，揭示SIRT1在皮膚光老化中的作用機制。
結題摘要
本項目按照研究計畫進行，歷時3年，已經完成課題設計的內容，試驗結果已經發表2篇SCI文章，另外一部結果正在整理投稿中。 一、試驗主要完成的內容包括以下幾點： 1.細胞光老化模型的建立：本試驗以亞毒性劑量的UVA連續5天照射人皮膚成纖維細胞，誘導細胞老化，檢測了細胞增殖活力、細胞凋亡並用β-半乳糖苷酶染色判定細胞的老化程度。採用的劑量為UVA（5J/cm2）連續照射5天，累積照射劑量為25J/cm2。 2.SIRT1及其它老化相關基因的表達：與既往人體學實驗結果一致，在用亞毒性劑量照射成纖維細胞的過程中SIRT1的表達增加。同時還檢測了與老化相關的其它基因，p53,p21,p16,乙醯化p5表達均增加。 3.SIRT1基因沉默構建的驗證：通過脂質體轉染方法，將SirT1 siRNA及作為對照的Control siRNA轉染皮膚成纖維細胞，轉染24h後收集細胞提取mRNA，轉染48小時後收集細胞提取蛋白。試驗結果所示，SirT1 siRNA明顯抑制SIRT1基因在RNA和蛋白水平的表達量，Control siRNA轉染後對SIRT1基因表達沒有干擾。 4.SIRT1基因沉默對細胞活力的影響：當特異性沉默SIRT1基因時，細胞活性急劇降低，約為正常細胞活性的20%，對細胞加以UVA照射，細胞活性進一步降低。 5.SIRT1基因沉默對端粒長度的影響：實時螢光定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）顯示，與對照組相比較，UVA處理組連續低劑量照射5天后，端粒長度明顯縮短；而當特異性沉默SIRT1基因後，細胞端粒長度顯著縮短，UVA照射後進一步加劇端粒縮短。 6.紫外線在誘導細胞老化時，SIRT1高表達，而紅光可拮抗紫外誘導的細胞光老化，涉及的通路包括SIRT1通路、乙醯化p53和MAPK通路。 7.特異性沉默SIRT1基因後，細胞端粒長度顯著縮短，UVA照射後進一步加劇端粒縮短，紅光通過SIRT1通路保護端粒的長度。 二、已經發表的文章：2篇論著，均為SCI收錄。 三、參加會議：參加兩次青年科學家論壇，並大會發言，分別為第279次和第285次青年科學家論壇
