亞細胞定位是指某種蛋白或表達產物在細胞內的具體存在部位。例如在核內、胞質內或者細胞膜上存在。GFP是綠色螢光蛋白，在掃描共聚焦顯微鏡的雷射照射下會發出綠色螢光，從而可以精確地定位蛋白質的位置。
基本介紹
- 中文名：亞細胞定位
- 外文名：subcellular localization
定義,套用實例,
定義
例如在核內、胞質內或者細胞膜上存在。GFP是綠色螢光蛋白，在掃描共聚焦顯微鏡的雷射照射下會發出綠色螢光，從而可以精確地定位蛋白質的位置。
GFP，實際是給你要研究的物質加上標記，在此相當於報告蛋白的作用。使用GFP必須構建融合蛋白載體，並在轉染之後有效表達。這樣，若在螢光顯微鏡下看到細胞內某一部位存在GFP信號，說明和GFP融合的蛋白也存在於該部位，這樣就達到了確定某物質亞細胞定位的目的。
套用實例
基因槍法轉化洋蔥表皮細胞：
分別用70%乙醇和滅菌蒸餾水清洗金粉（直徑為1 μm），加入滅菌蒸餾水製成金粉懸浮液，取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋蔥表皮的玻璃皿中，邊振盪邊加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP質粒，逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亞精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2，振盪混勻。基因槍GDS-80轟擊時氦氣罐的氣壓為1 300 psi，取10 μL DNA 包裹好的微粒懸浮液加到基因槍中央，進行轟擊，之後放置25℃避光過夜培養，使用ConfocalLaser雷射共聚焦顯微鏡觀察。
GaMYB2 在洋蔥表皮細胞中的瞬時表達分析：採用基因槍轟擊的方法，用包裹質粒的金粉對洋蔥表皮進行轟擊，暗培養過夜後，在雷射共聚焦顯微鏡下進行觀察，從圖A 中可以看出對照GFP空載體在整個洋蔥細胞均能看到綠色螢光，為組成型表達；從圖B 中發現GaMYB2-GFP 的融合表達載體只能在細胞核中能看到綠色螢光，這進一步證明該蛋白不具有跨膜蛋白結構，定位在細胞核中，具有轉錄因子的一般特徵。
