《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》是雲南生物谷燈盞花葯業有限公司於2010年10月26日申請的發明專利，該專利申請號為2010105190131，公布號為CN101974012A，公布日為2011年2月16日，發明人是杜江、林艷和、林炎海。
《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》涉及一種具有概述圖所示結構式的新化合物，該化合物可以自菊科飛蓬屬植物燈盞細辛Erigeron breviscapus（Vant.）Hand.-Mazz.的乾燥全草中提取分離得到。所述的化合物具有抗炎性反應、抗血小板聚集、抗血栓及擴血管作用，可用於製備用於心腦血管疾病治療的藥物。
2021年6月24日，《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》獲得第二十二屆中國專利優秀獎。
（概述圖為《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》摘要附圖）
基本介紹
- 中文名：一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯
- 申請人：雲南生物谷燈盞花葯業有限公司
- 發明人：杜江、林艷和、林炎海
- 申請號：2010105190131
- 申請日：2010年10月26日
- 公布號：CN101974012A
- 公布日：2011年2月16日
- 地址：雲南省昆明北郊金殿
- Int. Cl.：C07D493/08; A61K31/357; A61P9/00
- 類別：發明專利
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,試驗研究,技術領域,權利要求,實施方式,專利榮譽,
專利背景
截至2010年10月，以冠心病、腦卒中（腦中風）為代表的心腦血管疾病發病率居高不下，其病死率位居人類各類疾病死亡率首位。尋找新的、有效的治療心腦血管疾病藥物是當今製藥及臨床醫學界非常關注的難點及熱點。
燈盞細辛又名燈盞花，系菊科飛蓬屬值物Erigeron Breviscapus（Vant.）Hand.-Mazz.的乾燥全草，具有散寒解表，祛風除濕，活絡止痛的功效。雲南藥物研究所張人偉等首次從燈盞細辛中分離到黃酮類活性成分燈盞乙素，並把燈盞乙素為主、含少量燈盞甲素（芹菜素苷）的混合物稱為燈盞花系（breviscapin）[張人偉，楊生元，林永月，藥學學報（1981），16（1），68-6]。除了燈盞乙素外，專利CN1136434公開了二咖啡酸奎寧酸酯類化合物3，5-二咖啡醯基奎寧酸和3，4-二咖啡醯基奎寧酸（3，4-dicaffeoyl quinic acid）]。CN1064236C則公開了焦袂康酸（promenonic acid）及飛蓬苷（erigenoide）在治療心腦血管疾病方面套用。張衛東等申請了從燈盞細辛中分離到的活性成分1-（2’-γ-吡喃酮）-6-咖啡醯基-β-D-葡萄糖苷的製劑和製備方法的專利CN1252276。專利CN1462750公開了從燈盞細辛中分離到的活性成分飛蓬酯乙及其製備方法和在製藥中的套用。除此之外，尚未見其他自燈盞細辛中發現的新化合物公開。
截至2010年10月，自燈盞細辛中提取的、具有治療心腦血管疾病活性的藥物很多。其中大部分為多種化合物的混合物，這些藥物雖然具有治療作用，但多種成分必然造成如下的問題：療效的均一性差、質量控制難、副作用難以控制（注射劑尤其明顯）。單類化合物有效的藥物僅有燈盞花素製劑，難以滿足複雜的臨床醫學需求。
鑒於如上原因，《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》的發明人經過深入研究，從燈盞細辛中提取分離出新的化合物：燈盞細辛酸乙酯（Ethyl brevicate）。經試驗證明其具有抗炎性反應、抗血小板聚集、抗血栓及擴張血管作用，可用於製備用於治療心腦血管疾病的藥物。並提供了燈盞細辛酸乙酯的提取製備方法。
發明內容
專利目的
《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》針對專利背景中相關的技術空白，公開新活性成分燈盞細辛酸乙酯。
技術方案
《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》提供了具有如下的結構式化合物燈盞細辛酸乙酯：
《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》結構數據如下：
HRESIMS：m/z 521.1428[M+Na]（cal for C26H26O10Na.521.1423），[α]D，-92.05°（0.088，甲醇）；
IR（KBr壓片）：3565，2997，2967，1720，1607，1520，1458，1316，1155，1090，1047，1024，831，716cm；
UVλmax（MeOH）：228.8（19162），315.8（17264）nm；
H NMR（400MHz，DMSO-d6，ppm）：1.24（3H，t，J＝7.2Hz，OAc），2.29-2.58（2H，m，H-2α，H-2β），3.96，4.14（each 1H，m，H-9），4.18（1H，m，H-6），4.21（2H，q，J＝7.2Hz，OAc），4.75（1H，t，J＝4.0Hz，H-5），5.36（1H，t，J＝5.2Hz，H-4），5.70（1H，t，J＝5.6Hz，H-3），6.23（1H，d，J＝16Hz，H-3”），6.73（2H，d，J＝8.0Hz，H-6”，H-8”），7.31（2H，d，J＝8.0Hz，H-5”，H-9”），7.36（1H，d，J＝16Hz，H-2”），7.54（2H，m，H-4’，H-6’），7.66（1H，m，H-5’），8.01（2H，m，H-3’，H-7’）。
C NMR（100MHz，DMSO-d6，ppm）：102.8（C-1），38.3（C-2），65.2（C-3），67.1（C-4），74.4（C-5），83.3（C-6），59.1（C-9），167.3（C-10），165.6（C-1’），130.0（C-2’），129.9（C-3’，C-7’），129.3（C-4’，C-6’），133.3（C-5’），165.3（C-1”），146.1（C-2”），113.5（C-3”），125.1（C-4”），130.8（C-5”，C-9”），116.2（C-6”，C-8”），160.6（C-7”），14.4，62.1（OAc）。
該化合物為新化合物，與專利CN1462750中公開的飛蓬酯乙骨架相同，但取代基及位置均不同。飛蓬酯乙是分別在3，5位形成咖啡酸酸酯，而《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》涉及的燈盞細辛酸乙酯則3位上由苯甲醯基取代形成苯甲酸酯，而4位上則形成對羥基苯丙烯酸酯。
《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》所述藥學上可接受的載體是指藥學領域常規的藥物載體，例如：稀釋劑、賦形劑如水等，填充劑如澱粉、蔗糖等；黏合劑如纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；濕潤劑如甘油；崩解劑如瓊脂、碳酸鈣和碳酸氫鈉；吸收促進劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇；吸附載體如高嶺土和皂黏土；潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣和鎂、和聚乙二醇等。另外還可以在組合物中加入其他輔劑如香味劑、甜味劑等。
《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》提供了製備權利要求1的該發明化合物的方法：取燈盞細辛的全草或地上部分，粉碎，用0-95％乙醇或0-95％丙酮水溶液提取三次，合併三次提取液，減壓濃縮。濃縮液用聚醯胺樹脂層析，先用水洗脫，再用50-90％的乙醇洗脫，收集50-90％乙醇洗脫液後減壓濃縮。此部分濃縮液至少可用如下方法分離製備得到燈盞細辛酸乙酯：1、用矽膠反覆層析製備；2、用增/減壓反相（Rp-18）柱層析製備；3、用葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20）反覆純化製備；4、用上述1結合2和/或3的方法製備。
試驗研究
一、心腦血管方面的藥理作用
1.對不同誘導劑誘導血小板凝集的影響
1.1材料：燈盞細辛酸乙酯：20毫克/千克灌胃；空白對照組：生理鹽水；陽性對照：阿司匹林。
1.2實驗方法：豚鼠分組（每組8隻），灌胃5天，空白對照用生理鹽水。末次給藥1小時後頸動脈採血，以枸櫞酸鈉抗凝，混勻，離心，合併上清液作為PRP（富血小板血漿），血小板計數；餘下血漿離心，取上清液作為PPP（貧血小板血漿）；以PPP調零，取PRP300微升加入比濁管，37攝氏度溫育，加入誘導劑PAF（血小板活化因子），聚集不同時間，記錄數據。結果見表1。
表1
與空白對照組比較**p＜0.01。
用ADP誘導劑的試驗結構與上述實驗結果類似。
由上述結果可知，燈盞細辛酸乙酯能抑制不同誘導劑誘導的血小板聚集（凝集）、降低最大聚集率，效果與阿司匹林類似。
2.對大鼠體外血栓形成的影響
按照藥理學公知方法取下分別測定血栓濕重及血栓乾重。
結果表明，在大鼠動脈-靜脈血流旁路術血栓形成的實驗中，與模型對照組比較，燈盞細辛酸乙酯組P＜0.01；在大鼠體外血栓形成過程中，燈盞細辛酸乙酯使血栓濕重較對照組比較有顯著性差異（P＜0.01）。
二、抗炎性方面的藥理作用（對二甲苯致小鼠皮膚毛細血管通透性的影響）
該發明化合物：20毫克/千克灌胃；
對照組：生理鹽水；
實驗方法：參照陳奇主編的《中藥藥理研究方法學》製作動物炎症模型，結果見下表。
與對照組比較**P＜0.01。
三、血管活性試驗
表2為燈盞細辛酸乙酯對苯腎上腺素誘導兔主動脈收縮的影響（n＝10）。
表2
**P＜0.01vs給藥前對照。
鑒於燈盞細辛酸乙酯具有以上藥理活性，因此預想燈盞細辛酸乙酯可用於治療心腦血管疚病，尤其是冠心病、腦卒中（中風）。
《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》可單獨或與其它藥用許可的輔料按相關技術製成片劑、膠囊、滴丸、顆粒劑等口服劑型或注射液、凍乾劑等注射用劑型。
技術領域
《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》涉及一種具有抗炎性反應、抗血小板聚集、抗血栓及擴血管作用的新化台物，以及含該化合物作為活性成分的治療心腦血管疾病的藥用組合物。具體的說是從燈盞細辛中提取的新化合物燈盞細辛酸乙酯（Ethyl brevicate）、製備方法及其在製藥中的套用。
1.具有如下的結構式化合物燈盞細辛酸乙酯：
2.一種製備權利要求1的化合物的製備方法，其特徵在於取燈盞細辛的全草或地上部分，粉碎，用0-95％乙醇或0-95％丙酮水溶液提取三次，合併三次提取液，減壓濃縮，濃縮液用聚醯胺樹脂層析，先用水洗脫，再用50-90％的乙醇洗脫，收集50-90％乙醇洗脫液後減壓濃縮，此部分用矽膠反覆層析，製備得到燈盞細辛酸乙酯。
3.如權利要求2的一種製備權利要求1的化合物的製備方法，其特徵在於取燈盞細辛的全草或地上部分，粉碎，用0-95％乙醇或0-95％丙酮水溶液提取三次，合併三次提取液，減壓濃縮，濃縮液用聚醯胺樹脂層析，先用水洗脫，再用50-90％的乙醇洗脫，收集50-90％乙醇洗脫液後減壓濃縮，此部分用矽膠反覆層析，結合增/減壓反相Rp-18柱層析、Sephadex LH-20反覆純化，製備得到燈盞細辛酸乙酯。
4.藥物組合物，其含有權利要求1的化合物作為活性成分以及藥學上可接受的載體。
5.權利要求1的化合物在製備治療心腦血管疾病的藥物中的套用。
實施例1：燈盞細辛酸乙酯的提取製備工藝
取燈盞細辛的全草10千克，粉碎，用70％丙酮水溶液提取三次，合併三次提取液，減壓濃縮。濃縮液上聚醯胺樹脂層析，先用水洗脫，再用60％的乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫液後後減壓濃縮，此部分用矽膠反覆層析，製備得到燈盞細辛酸乙酯（Ethyl brevicate）50克。
實施例2：燈盞細辛酸乙酯的提取製備工藝
取燈盞細辛的全草10千克，粉碎，用70％乙醇水溶液提取三次，合併三次提取液，減壓濃縮。濃縮液上聚醯胺樹脂層析，先用水洗脫，再用80％的乙醇洗脫，收集80％乙醇洗脫液後後減壓濃縮，此部分用減壓反相（Rp-18）柱層析分離製備得到燈盞細辛酸乙酯（Ethyl brevicate）60克。
實施例3：燈盞細辛酸乙酯的提取製備工藝
取燈盞細辛的全草10千克，粉碎，用水溶液提取三次，合併三次提取液，減壓濃縮。濃縮液上聚醯胺樹脂層析，先用水洗脫，再用50％的乙醇洗脫，收集50％乙醇洗脫液後後減壓濃縮，此部分用葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20）反覆純化製備得到燈盞細辛酸乙酯（Ethyl brevicate）40克。
實施例4：燈盞細辛酸乙酯的片劑的製備工藝
將燈盞細辛酸乙酯10克與澱粉混合均勻後，加入10％的澱粉漿10克製成軟材，過14目篩制粒，在70-80攝氏度溫度下乾燥，過12目篩整粒，加硬脂酸鎂2克混合後，壓製成1000片，即得。每片含燈盞細辛酸乙酯10毫克。
實施例5：燈盞細辛酸乙酯的膠囊劑製備工藝
加10克燈盞細辛酸乙酯，加80攝氏度乾燥的澱粉30克和硬脂酯鎂2克混合均勻後，分裝成1000粒膠囊，每粒膠囊含燈盞細辛酸乙酯10毫克。
實施例6：燈盞細辛酸乙酯的注射液製備
10克燈盞細辛酸乙酯溶解在5000毫升冷的注射用蒸餾水中，85克氯化鈉、2克亞硫酸鈉混合溶解在1000毫升熱的注射用蒸餾水中。將兩種溶液混合，加水至10000毫升，調節pH值在5.0-7.0濾棒過濾，膜過濾，澄明度檢查合格後加氮氣封瓶，在115攝氏度，10標準大氣壓壓力下滅菌25分鐘。
實施例7：燈盞細辛酸乙酯的注射用凍乾劑製備
取適量輔料亞硫酸鈉、氯化鈉、甘露醇，加注射用水1600毫升溶解，加活性炭3.2克，吸收30分鐘陳熱原，過濾除去活性碳，在濾液中加入燈盞細辛酸乙酯10克，調節pH為6.0～7.3，微孔濾膜濾過，加注射用水至2000毫升，分裝為1000支，冷凍乾燥，即得。
專利榮譽
2021年6月24日，《一種具有藥用活性的新化合物燈盞細辛酸乙酯》獲得第二十二屆中國專利優秀獎。
