p53抑癌基因直接調控的miRNA靶基因的識別及電化學研究

《p53抑癌基因直接調控的miRNA靶基因的識別及電化學研究》是依託中山大學，由戴宗擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：p53抑癌基因直接調控的miRNA靶基因的識別及電化學研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：戴宗
• 依託單位：中山大學

中文摘要

本項目以p53抑癌基因直接調控的miRNA靶基因的識別及分析為研究目的。篩選新的具有p53結合位點且調控p53抑癌基因上游轉錄因子和下游基因的miRNA。研究miRNA靶基因預測方法，包括：建立基於粒子群算法（PSO）特徵選擇和支持向量機（SVM）聯用技術等；構建整合預測模型，利用信息融合方法進行預測。建立p53抑癌基因調控的miRNA靶基因的電化學檢測新方法，包括：建立p53抑癌基因突變檢測新方法和多突變熱點同時檢測技術；發展實時跟蹤p53抑癌基因突變的動態檢測技術；研究miRNA的電化學檢測方法;研究p53抑癌基因突變與miRNA靶基因表達水平的關係；研究其它活性分子（包括藥物分子等）對腫瘤細胞的miRNA表達的影響。本課題研究將有助於更深入研究p53基因調控網路的分子機制與調控規律，為腫瘤的預測和診斷，以及藥物設計和篩選提供理論依據。

結題摘要

本項目以p53基因直接調控miRNA靶基因的識別及其分析為研究目的。研究了miRNA錯配能量圖譜，建立了系列基於核酸恆溫擴增技術的miRNA靈敏分析方法和細胞內miRNA的原位成像分析技術；發展了p53腫瘤抑制基因片段特異位點甲基化修飾靈敏電化學和螢光分析方法；研究了基因甲基化修飾動態檢測電化學技術；探索了藥物小分子對DNA甲基化酶（Dnmt3a）的影響。項目的研究取得以下幾方面進展：（1）開發了基於三重循環放大反應串聯的核酸擴增方法，非對稱恆溫指數擴增技術，以及基於環形錘狀對稱模板的恆溫指數擴增技術，實現了組織、血液、單細胞miRNA表達的靈敏分析。（2）將化學氧化與核酸恆溫指數擴增技術結合，建立了p53腫瘤抑制基因片段單特異位點甲基化檢測新方法（COEXPAR）；通過設計多功能電化學分子信標，建立了方便快速的p53腫瘤抑制基因片段多特異位點甲基化修飾同時檢測技術。（3）基於DNA長程電子傳遞特性並結合溴代衍生化增敏，發展了基因甲基化修飾過程連續檢測電化學方法。（4）研究了小分子抑制劑對 Dnmt3a 酶活性的影響。研究成果發表SCI論文8篇，包括Nucleic Acids Res. 1篇，Anal. Chem. 2篇，TrAC-Trends in Anal. Chem. 1篇，Biosens. Bioelectron. 3篇，申請發明專利6件。本課題的研究實現了核酸恆溫擴增方法在擴增效率、特異性和擴增偏差的同步提升，實現單細胞水平miRNA的準確分析；改善了當前基因甲基化修飾分析技術操作繁瑣，成本高，耗時長等不足；提出了基因甲基化修飾動態檢測技術。本項目在miRNA和基因甲基化相關疾病的研究方面具有理論意義和實用價值。