《microRNA靈敏檢測及其與環境污染物相關性研究》是依託北京工業大學，由魯理平擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA靈敏檢測及其與環境污染物相關性研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：魯理平
- 依託單位：北京工業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
MicroRNA是一類長度為20～26 個核苷酸的非編碼內源性單鏈小分子RNA。當生物暴露於環境污染物時會引起相關microRNA表達發生變化，進而導致其靶基因表達發生改變,且MicroRNA的表達水平與許多疾病密切相關。所以，microRNA的定量檢測對相關疾病的診斷與治療以及環境污染物的基因毒理研究具有重要意義。然而通常的microRNA檢測技術如：逆轉錄聚合酶鏈式反應等存在試劑及儀器昂貴、耗時等缺點。本項目擬以DNA電荷傳遞對鹼基堆積結構高度靈敏的依賴性為理論依據，研製高效檢測microRNA的電化學發光感測器,以電化學及電化學發光為主要技術手段系統研究microRNA檢測平台的影響因素以及microRNA與環境污染物的相關性，提出一套完整的靈敏、特異檢測機制，構建相關性曲線。為提高microRNA檢測水平、揭示環境污染物基因毒理以及進一步擴展DNA電荷傳遞的套用提供理論和技術支持。
結題摘要
MicroRNAs是一類含有19-23個鹼基的非編碼單鏈小分子RNA，通過鹼基互補與mRNA序列的3′UTR區或編碼區不同程度結合從而調控靶基因的表達，在動植物的發育、細胞生長分化和凋亡、代謝等生命活動過程中發揮重要的調控作用。有關miRNA研究的基礎是對其高靈敏和選擇性的測定。如何切實增強電化學發光信號實現microRNA的靈敏測定是該項目的主要研究內容。首先基於核酸放大機制我們設計了雙聯特異性酶和雜交鏈式反應的雙重放大方法實現了microRNA的超靈敏檢測；其次在分析電化學發光機理的基礎上設計了共反應劑原位產生進一步增強了電化學發光信號；我們還開發了新的電化學發光淬滅體系-甲基藍淬滅三聯吡啶釕。並在研究中發現最佳化DNA探針的固載方法和狀態對提高檢測的靈敏度具有重要意義。設計並套用了三腳架結構的ＤＮＡ探針和點擊化學組裝方法獲得了高雜交效率的均一化感測界面。細胞水平的MicroRNAs測定對研究環境污染物的毒理提供了新的技術。
