《miRNAs調控RPS14影響MDS細胞生物學行為的研究》是依託武漢大學，由熊蓓擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miRNAs調控RPS14影響MDS細胞生物學行為的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：熊蓓
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
miRNAs作為基因轉錄後水平調控的關鍵因素之一，已被證實在多種腫瘤的發生中發揮重要作用。骨髓增生異常綜合徵（MDS）是一種難治性血細胞質、量異常的髓系腫瘤，發病機制不明。已有研究表明某些miRNAs的異常表達與MDS的發病關係密切,但對於miRNAs參與MDS發病的作用機理以及MDS中miRNAs與靶蛋白之間的關係鮮有報導。最近發現核糖體蛋白小亞基14（RPS14）在各種類型的MDS中普遍表達低下，但機制尚不清楚。基於此，本課題擬從以下三個方面展開研究：①篩選和驗證生物信息學預測的靶向調控RPS14的miRNAs；②檢測調控RPS14的miRNAs及RPS14在MDS中的表達；③建立相對穩定的調控RPS14的miRNAs突變小鼠模型，探討miRNAs對RPS14的表達及造血乾/祖細胞分化、增殖和凋亡的影響。有望從新的角度揭示MDS的發病機制，為MDS的診斷、治療及預後判斷提供新的思路。
結題摘要
miRNAs作為基因轉錄後水平調控的關鍵因素之一，已被證實在多種腫瘤的發生中發揮重要作用。骨髓增生異常綜合徵（MDS）是一種難治性血細胞質、量異常的髓系腫瘤，發病機制不明。已有研究表明某些miRNAs的異常表達與MDS的發病關係密切,但對於miRNAs參與MDS發病的作用機理以及MDS中miRNAs與靶蛋白之間的關係鮮有報導。有研究發現核糖體蛋白小亞基14（RPS14）在各種類型的MDS中普遍表達低下，但機制尚不清楚。本課題在此基礎上展開研究，通過生物信息學軟體及螢光素酶報告系統篩選及鑑定出在MDS中靶向調控RPS14的miR-223,然後由免疫螢光結果篩選出高表達RPS14的細胞株（K562細胞株-慢性粒細胞白血病細胞株）。套用慢病毒感染的方法，通過分別構建過表達和沉默miR-223的載體，轉染MDS細胞株後套用流式方法測定感染效率，並進一步套用PCR在RNA水平驗證感染率，從而成功獲得外源性過表達或抑制調控RPS14的miR-223的目標實驗細胞。套用MTT實驗及流式對感染慢病毒miR-223後的SKM-1及K562細胞株進行增殖和凋亡檢測後提示：過表達慢病毒miR-223後促進細胞增殖，抑制凋亡；沉默後可促進細胞凋亡，抑制增殖。Western blot證實miR-223的過表達可以促進RPS14基因沉默。細胞分化實驗發現miR-223可抑制紅系分化。研究初步明確了miR-223通過靶向調控RPS14參與MDS幹細胞發病的作用機制。
