《miRNA-212對新生小鼠腦損傷TRAIL-DR5信號通路的調控作用》是依託復旦大學，由黃志恆擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miRNA-212對新生小鼠腦損傷TRAIL-DR5信號通路的調控作用
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：黃志恆
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
認知缺陷是早產兒腦損傷主要後遺症，與皮層神經元的選擇易損性密切相關，但神經元損傷的機制尚不清楚。我們前期研究發現TRAIL-DR5死亡信號通路介導神經元損傷，鑒於miRNA-212與死亡信號的調節密切相關，本項目將進一步探討miRNA-212是否調控上述死亡信號通路及相關的機制。擬在原有基礎上，採用新生小鼠缺氧缺血腦損傷動物模型與TRAIL誘導的神經元損傷細胞模型，利用免疫組化、分子生物、神經病理、神經行為等技術，觀察：(1)miRNA-212及靶蛋白的表達與神經元凋亡的關係。（2）利用miRNA獲得與缺失技術上調與下調miRNA-212的功能，觀察TRAIL-DR5信號下游分子的變化與神經元的損傷的情況。探討：（1）miRNA-212是否調控TRAIL-DR5信號通路；（2）miRNA-212通過哪些關鍵蛋白調控TRAIL-DR5信號通路發揮神經保護作用，為早產兒腦損傷的防治提供新思路。
結題摘要
早產兒腦室周圍白質損傷同時伴有灰質神經元/軸突的病變，腫瘤壞死因子相關的凋亡誘導配體（TRAIL）與其死亡受體（DR）、誘騙受體（DcR）受體結合，參與中樞神經系統多種炎性反應性疾病，但在早產兒腦損傷中尚見報導；研究發現：①HI 後 24h，免疫組化顯示損傷側皮層表達大量 TRAIL、死亡受體DR5、誘騙受體DcR1、DcR2 陽性細胞（P＜0.05）。並且損傷側皮層TRAIL/CD68 雙陽性細胞數目明顯高於對照側。②Western blot 和RT-PCR結果顯示損傷側皮層大量表達 TRAIL、DR5 蛋白（P＜0.01）。第二，DR6也是與神經細胞損傷及凋亡密切相關，本項目發現：HIBD 組皮層DR6 表達在HIBD 後24 h 最顯著，72 h、7 d 逐漸下降（P＜0.01）；HIBD 後24、72 h，HIBD 組DR6 表達量均高於對照組（P 均＜0.01）。HIBD 後24 h，HIBD 組皮層Caspase-3 陽性細胞高於對照組（P＜0.05）。HIBD 後7 d，HIBD 組皮層神經元數目低於對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。HIBD 後60 d，T-迷宮試驗顯示HIBD 組認知下降（P＜0.05）。 發現DR6 信號通路在未成熟腦神經細胞損傷中起重要作用，可能導致以後認知功能障礙。第三、探討圍產期反覆感染對未成熟腦炎症及髓鞘發育的影響，與對照組和宮內感染組相比，Western blot結果顯示反覆感染組炎症因子TNF-a和Caspase-3的表達水平均明顯高於宮內感染組與正常對照組（均P＜0.01）；髓鞘發育情況評估顯示反覆感染組MBP蛋白表達量明顯低於宮內感染組與正常對照組（P＜0.01）。生後13 d時反覆感染組小鼠神經反射完成時間均明顯長於其它組。④實驗結果顯示：相對於神經元+PBS刺激組，在給予miR212的抑制劑後，PEA15蛋白表達上升，DR5，FADD和caspse3表達下降, 細胞存活率下降（P＜ 0.05） ;給予miRNA-212的mimic後，PEA15蛋白表達下調， DR5 、 FADD和caspse3表達上升, 細胞存活率增加（P＜0.05）.在給予miR212的抑制劑+TRAIL12小時後, PEA15蛋白表達下調，DR5，FADD和 和caspse3表達上升顯著,細胞存活率增加（P＜0.05）。
