X-Gal

X-gal也稱5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside或5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside，X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的顯色底物，在β-半乳糖苷酶的催化下會產生藍色產物。常用於β-半乳糖苷酶的原位染色檢測以及藍白斑篩選。

基本介紹

• 中文名： 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷
• 英文名：x-gal
• 化學式：C14H15BrClNO6
• 分子量：408.63
• CAS登錄號：7240-90-6

基本信息

X–gal是β–半乳糖苷酶（β–galactosidase）的底物，水解後呈藍色。基於這個特點，pUC系列載體DNA（或其他帶有lacZ基因載體DNA）以lacZ 缺失細胞為宿主進行轉化時、或用M13噬菌體載體DNA進行轉染時，如果在平板培養基中加入X–gal和IPTG，由於β–半乳糖苷酶的α–互補性，可以根據是否呈現白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑選出基因重組體。

使用方法

首先把X-gal配製成20 mg/ml的二甲基甲醯胺（DMF）溶液（-20℃避光保存），然後在100 ml的瓊脂培養基中，加入200 μl的上述溶液、100 μl的IPTG（24 mg/ml）和100 μl的Amp（100 mg/ml），製作成X-gal、IPTG、Amp平板培養基。當DNA片段插入至pUC系列載體（或其他帶有lacZ、Amp基因載體），然後轉化至lacZ缺失細胞中後，塗布上述的X–gal、IPTG、Amp平板培養基，可根據長出菌體的藍白色，而方便地挑選出基因重組體（白色為具有DNA插入片段的基因重組體）。

注意事項

1. 培養噬菌體時，Top agar中的添加量為：50 μl/3 ml（20mg/ml）。
   
2. 含有X-gal的培養基4℃避光保存，須在1~2周內使用。