《Wnt蛋白通過S100蛋白調控涎腺腺樣囊性癌轉移的機理研究》是依託北京大學，由王衣祥擔任負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Wnt蛋白通過S100蛋白調控涎腺腺樣囊性癌轉移的機理研究
- 項目負責人：王衣祥
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
腫瘤是人類的頑疾，而轉移是腫瘤治療失敗的主要原因。目前腫瘤的轉移機理不明。研究證實Wnt通路和S100家族蛋白與多種腫瘤的發生及轉移有關。但在涎腺腺樣囊性癌研究領域中，Wnt通路是否與SACC轉移有關?S100蛋白是否調控SACC轉移?以及Wnt與S100蛋白之間的調控關係，均未知。本研究擬以一對來源相同但轉移能力不同的涎腺腺樣囊性癌細胞系SACC-83和SACC-LM為研究對象，來探討腫瘤轉移的機理。通過前期研究發現:Wnt2B、Wnt3A、Wnt5A、Wnt6、Wnt7B、Wnt11、Wnt16、S100A6、S100A7、S100A8、S100A9、S100A12、S100P在高轉移細胞系中表達均增高，因此我們提出研究假設WNT蛋白通過S100蛋白來調控SACC轉移，擬通過免疫組化、Real time PCR、Western blot、及Wnt通路抑制實驗等手段加以深入研究。
結題摘要
腫瘤是威脅人類生命的頑疾，轉移是腫瘤治療失敗的主要原因。目前腫瘤的轉移機理不明。以往研究證實Wnt通路和S100家族蛋白與多種腫瘤的發生及轉移有關。但在涎腺腺樣囊性癌研究領域中未知。本研究以一對來源相同但轉移能力不同的涎腺腺樣囊性癌同源異質細胞系SACC-83和SACC-LM為研究對象，首先檢測和S100家族蛋白和Wnt家族蛋白在這兩個細胞系的表達模式，其次再利用人重組S100P蛋白處理SACC-83細胞，通過CCK8實驗、劃痕實驗和Transwell侵襲實驗，初步判定S100P在SACC轉移中的作用。最後利用轉外源基因或shRNA質粒，建立穩定高表達S100P的SACC-83細胞系、敲低S100P的SACC-83-shS100P細胞系和Wnt通路激活的SACC-83-AW細胞系、並以此3種細胞系及SACC-83、SACC-LM細胞係為模型，利用免疫組化、Real time PCR、 Western blot、劃痕實驗和侵襲實驗、通路抑制實驗等技術來探討SACC腫瘤轉移的機理。CCK8實驗、劃痕及侵襲實驗結果顯示S100P與Wnt蛋白在SACC-LM細胞中高表達；但人重組S100P蛋白處理與未處理的SACC-83相比，S100P蛋白處理過的SACC細胞的增殖數例、運動距離和侵襲細胞數量之間無統計學差異（P＞0.05）。而穩定轉染S100P基因的SACC-83-S100P細胞系、穩定敲低S100P的SACC-83-shS100P細胞系均可以促進SACC細胞的運動和侵襲能力（P＜0.05），其機理是通過上調MMP3和MMP14表達而實現的。這提示S100P與SACC-83的運動、侵襲能力無關。在激活Wnt通路細胞系SACC-83-AW和SACC-83的Wnt通路抑制試驗的結果激活Wnt通路後，SACC-83的運動和侵襲能力顯著增強，但S100P的表達量未見增高，這提示Wnt通路與SACC轉移關係密切。Real time PCR和Western Blot結果進一步揭示SACC-83-AW具有高運動侵襲能力是因為其高表達MMP2、p-Akt、和COX2。但在SACC-LM中僅COX2、MMP9和MMP14表達高，這提示SACC-83-AW與SACC-LM具具有的高侵襲能力的機制可能不同。結論：SACC的轉移機制仍不甚清楚，通過本課題的研究S100P與SACC-83和SACC
