《VEGF調控Nestin表達參與視網膜血管新生的機制研究》是依託中山大學，由蔡衛斌擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：VEGF調控Nestin表達參與視網膜血管新生的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：蔡衛斌
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
前期我們利用基因敲除技術發現Nestin與胚胎血管形成密切相關，最近我們又觀察到Nestin表達於腫瘤組織新生血管內皮細胞和體外培養的視網膜微血管內皮細胞(RMEC)，且其表達可被VEGF上調。Nestin作為中間纖維蛋白參與構成細胞骨架，後者介導內皮細胞遷移和血管新生。我們以往研究證實VEGF是目前所知內皮細胞遷移和血管新生的最主要調節因子。由此，我們分析在RMEC細胞VEGF可能通過上調Nestin表達並改變細胞骨架和細胞運動能力從而促進眼視網膜血管新生。本課題擬以氧誘導視網膜血管新生模型和RMEC細胞為研究對象，採用基因敲除、體內外實驗、EMSA等方法，旨在獲得Nestin促進視網膜血管新生的可靠證據，闡述Nestin對RMEC細胞運動能力的影響及作用模式，證明VEGF能上調內皮細胞Nestin表達並深入探討其分子機制。本項目將為闡明Nestin參與視網膜血管新生提供充分的科學依據。
結題摘要
Nestin是新近發現的細胞骨架蛋白，在神經系統分化和發育中發揮重要作用。最近研究表明，Nestin在低分化或增殖狀態的血管內皮細胞或祖細胞高表達，提示其可能與血管新生有關，但機制尚不清楚。VEGF是血管生成調控的關鍵分子，不僅參與胚胎髮育，也參與腫瘤、眼內血管新生等病理性血管形成過程。血管新生和成熟是個高度複雜的協調過程，需要一系列配體激活受體的連鎖反應，而在此過程中VEGF信號傳導通常是其關鍵的限速步驟。已知VEGF通過調控血管內皮細胞增殖、運動和遷移促進血管形成。細胞骨架及其結合蛋白是內皮細胞運動和遷移的內在物質基礎，目前尚未證明VEGF是否能夠調節細胞骨架或相關蛋白以促進血管內皮細胞的運動與遷移。 前期，我們採用Nestin基因敲除小鼠模型初步證實了Nestin與胚胎血管發生和發育的相關性。本研究中，我們在體外培養的血管內皮細胞上證實VEGF能上調Nestin表達，觀察了低氧處理對Nestin表達的調控作用，並採用VEGFR拮抗劑反證這種調控關係的存在；設計和構建Nestin－ 血管內皮細胞亞系，觀察到Nestin基因沉默抑制了血管內皮細胞運動能力，並證實Nestin介導了VEGF對血管內皮細胞的促進作用；在氧誘導大鼠視網膜血管新生模型和鹼燒傷誘導大鼠角膜血管新生模型分析VEGF與Nestin的表達特點及在血管新生中的相關性；採用細胞劃痕實驗、體外血管形成實驗及顯微活細胞培養系統等方法分析VEGF調控Nestin表達改變內皮細胞運動能和血管形成；用FITC-鬼筆環肽標記F-actin和細胞骨架，分析了VEGF及Nestin對血管內皮細胞骨架的改變；在分子機制上，我們初步證實，VEGF對Nestin表達的誘導作用可能與p-ERK MAPK途徑有關，並進一步採用RNA-seq通量篩選VEGF處理後轉錄組變化，並採用Q-PCR驗證相關轉錄因子可能參與VEGF對Nestin的調控。 本項目的研究能夠初步明確Nestin調控血管新生的作用及其可能的分子機制，揭示其可能是VEGF介導的血管新生過程中特異性效應分子，是研發具有安全性和有效性的抗血管形成藥物的潛在靶點。
