miR-133a調控SRPK1上調VEGF165b對早產兒視網膜病變的作用及機制

《miR-133a調控SRPK1上調VEGF165b對早產兒視網膜病變的作用及機制》是依託蘇州大學，由徐華擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：miR-133a調控SRPK1上調VEGF165b對早產兒視網膜病變的作用及機制
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：徐華
• 依託單位：蘇州大學

項目摘要

早產兒視網膜病變（ROP）是世界兒童致盲的主要原因，其表現為視網膜新生血管及視覺功能障礙，目前尚缺乏有效的治療方法。我們前期研究發現ROP動物模型中視網膜內miR-133a顯著下調，過表達miR-133a能抑制血管內皮細胞的侵襲和保護低氧刺激下的神經元。生物信息學預測及初步驗證絲氨酸-精氨酸蛋白特異性激酶1（SRPK1）是miR-133a的靶基因，而SRPK1是調控VEGF選擇性剪接的重要分子。因此，本項目擬通過體內外模型觀察miR-133a對SRPK1與VEGF165b的調控規律，探討miR-133a對低氧條件下視網膜血管內皮及神經元細胞各種能力及功能的影響，並構建AAV2介導的miR-133a病毒，在動物模型上驗證其長期療效及機制。本研究通過闡明miR-133a調控SRPK1上調VEGF165b拮抗新生血管及保護神經元細胞的分子機制，為ROP治療提供新的干預手段。

結題摘要

早產兒視網膜病變（ROP）是世界上兒童致盲的主要原因之一，其表現為視網膜新生血管及視覺功能障礙，目前尚缺乏有效的治療方法。本研究擬闡明miR-133a調控SRPK1上調VEGF165b拮抗新生血管及保護神經元細胞的分子機制。本研究構建了小鼠氧誘導視網膜病變（OIR）模型以及低氧細胞模型，Q-PCR、Western Blot以及ELISA方法檢測miR-133a及其相關基因及蛋白的表達。雙螢光素酶實驗驗證miR-133a對SRPK1的調控作用。MTT法檢測細胞活性。劃痕、侵襲以及成管實驗觀察視網膜血管內皮細胞的功能。TUNEL法檢測神經元細胞的凋亡。玻璃體腔內注射AAV2介導的miR-133a，視網膜鋪片觀察視網膜新生血管，視網膜電圖檢測視網膜神經元功能。Western Blot檢測血視網膜屏障及凋亡相關蛋白的表達。Q-PCR檢測玻璃體腔內注射AAV2-miR133a後miR-133a、SRPK1及VEGF在眼內的長期表達情況。研究發現體內及體外ROP模型中miR-133a的表達下調，而SRPK1和total VEGF（或VEGF165a）的表達顯著上調。經miR-133a angomiR干預後，SRPK1和total VEGF（或VEGF165a）的表達顯著下調，而VEGF165b的表達不變或顯著上調。雙螢光素酶實驗證實SRPK1為miR-133a的下游靶基因。體外條件下miR-133a可以抑制視網膜血管內皮細胞的增殖、遷移、侵襲以及成管功能，miR-133a能夠抑制CoCl2引起的大鼠神經元細胞的凋亡，其機制可能是通過抑制促凋亡基因Bax以及上調抑制凋亡基因Bcl-2。眼內注射AAV2-miR-133a可以顯著抑制OIR小鼠視網膜新生血管以及部分提高小鼠視網膜神經元功能。MiR-133a可以挽救OIR小鼠視網膜內VE-cadherin的表達。玻璃體腔內注射AAV2-miR-133a可以實現miR-133a在小鼠眼內的長期表達，同時其能持續有效地抑制小鼠視網膜內SRPK1以及VEGF的表達。本研究發現miR-133a通過調控SRPK1上調VEGF165b實現了抑制視網膜新生血管、維持視網膜神經元功能的作用，且AAV2介導的miR-133a可以實現眼內的長期表達及抑制作用，為ROP的治療提供了新的理論依據及干預方法。