《VEGF和MMP-9在增生期血管瘤發生中的作用研究》是依託蘇州大學，由孫智勇擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：VEGF和MMP-9在增生期血管瘤發生中的作用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：孫智勇
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
血管瘤是嬰幼兒最常見的良性腫瘤，不僅影響美觀，影響生理功能，甚至一部分病變因潰瘍、感染、出血、高流量分流性心衰或特殊部位而危及生命。迄今為止，對其確切的發病機制仍不清楚，血管內皮細胞生長因子（VEGF）和基質金屬蛋白酶9 (MMP9)與血管瘤的血管增生有密切關係。我們構想VEGF和MMP9在血管瘤增生期快速發展起非常重要的作用，下調VEGF和MMP9基因的表達，對血管瘤可能有治療作用。我們擬製備血管瘤裸鼠移植模型，以VEGF基因和MMP9基因的RNAi為工具，下調VEGF和MMP9的表達，從VEGF和MMP-9兩者的角度探討血管瘤的發病機理，完善血管內皮祖細胞學說，通過VEGF和MMP9基因的RNAi沉默來探索新的血管瘤防治方法。
結題摘要
血管瘤是嬰幼兒最常見的良性腫瘤，不僅影響美觀，影響生理功能。迄今為止，對其確切的發病機制仍不清楚，血管內皮細胞生長因子（VEGF）與血管瘤的血管增生有密切關係。 建立人毛細血管瘤裸鼠移植模型，探討血管瘤裸鼠模型建立的最佳條件。 將手術切除的1例雌激素受體陽性的兒童增生期血管瘤組織製成組織塊，植入20隻裸鼠皮下，每隻4 處，將20隻裸鼠分為4個實驗組。實驗1 組在移植後給予普通鼠食餵養；實驗2 組在1組基礎上每周肌注雌二醇0.01 mg；實驗3組在1組基礎上每周肌注雌二醇0.1 mg；實驗4組在1組基礎上每周肌注雌二醇1mg，於移植後第30、60、90天切取移植瘤。移植瘤標本進行病理學光鏡檢查，用血管內皮細胞單克隆抗體CD31、CD34進行免疫組化染色。移植後早期各組標本內皮細胞大量變性、壞死，30d 後，單純餵養的實驗1組及實驗2組部分移植瘤開始吸收或形成膿腫及纖維化。實驗3、4組移植瘤開始緩慢生長。90d後實驗1組實驗2組移植瘤均未成活，實驗4組移植瘤部分成活，而實驗3組移植瘤全部成活。我們因此得出結論，適量的套用雌激素可建立穩定的人血管瘤裸鼠移植動物模型。該模型可以套用到基礎和臨床的血管瘤研究。 培養人血管瘤內皮細胞，利用RNA干擾技術下調HemECs中VEGF的表達，觀察其對血管瘤內皮細胞的影響。利用組織塊法培養HemECs，鑑定、篩選和純化後，分為A、B、C三組，分別為轉染組，空脂質體組和對照組。利用脂質體法將pGCsiU6/Neo/dsRED-VEGF真核表達質粒轉染到內皮細胞中。通過螢光顯微鏡大體觀察轉染效率和細胞生長情況、ELISA法檢測細胞分泌VEGF蛋白和MTT法檢測質粒轉染對HemECs的影響。轉染組培養上清中VEGF蛋白濃度在轉染的第1、3、5、7天分別為141.3±7.82、92.34±5.71、68.07±5.95及40.65±6.71pg/ml。差異均有統計學差異（P＜0.05）。我們因此得出結論，轉染後的細胞活性降低，轉染組VEGF蛋白明顯下降。這些都可以說明，VEGF在血管瘤內皮細胞生長、增殖之中起著非常重要的作用，這也為我們治療血管瘤提供一個新的靶點。
