《TRPC6-ILK在足細胞損傷致腎小球硬化中作用機制的研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由孫脊峰擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：TRPC6-ILK在足細胞損傷致腎小球硬化中作用機制的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：孫脊峰
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
足細胞損傷後導致的其數目減少是腎小球硬化發生髮展的重要原因，因此抑制足細胞的損傷是延緩進入腎衰竭的重要措施。TRPC6在包括局灶性節段腎小球硬化症在內的多種腎臟疾病中表達上調，且表達上調的TRPC6可通過介導的鈣離子內流增加參與血管緊張素II誘導的足細胞凋亡，過表達的TRPC6可造成足細胞骨架排列紊亂，解聚。另有研究顯示足細胞中ILK活性增高與細胞骨架、細胞外基質分泌、細胞轉分化等有關，而鈣離子內流與ILK的活性升高有關，因此在足細胞損傷中，TRPC6可能通過ILK介導一系列改變參與腎小球硬化的發生髮展。本研究擬證實在足細胞損傷過程中，表達上調的TRPC6可能通過其介導的鈣離子促使ILK的表達和活性增高，導致足細胞骨架紊亂、分泌細胞外基質蛋白增多、細胞間連線蛋白減少或異常分布，最終使足細胞損傷加重，數目減少，細胞外基質增多，從而在腎小球硬化發生髮展中起重要作用。
結題摘要
足細胞損傷後導致的其數目減少是腎小球硬化發生髮展的重要原因，因此抑制足細胞的損傷是延緩進入腎衰竭的重要措施。已知鈣離子內流與ILK的活性升高有關，因此在足細胞損傷中，TRPC6可能通過ILK介導一系列改變參與腎小球硬化的發生髮展。 本研究擬檢測腎臟疾病患者腎穿刺活檢中硬化腎小球內TRPC6和ILK的表達，通過體內外實驗觀察TRPC6通過介導的鈣離子對ILK及下游的Fn、MMP9等的影響。 研究結果：1、TRPC6主要表達於足細胞中，在疾病組織腎小球中的表達明顯高於正常腎臟（P值均＜0.05）。ILK在局灶節段性腎小球硬化症、狼瘡性腎炎及糖尿病腎病的ILK表達明顯高於正常腎組織（P值均＜0.05）。在局灶節段性腎小球硬化症及糖尿病腎病中，ILK與TRPC6表達呈正相關（r=0.906，P=0.000；r=0.694，P=0.004）。2、體外實驗中，與對照組相比，阿黴素（ADR）組中TRPC6、ILK、Fn和MMP表達明顯升高（P＜0.05），ZO-1表達明顯下降。shRNA抑制TRPC6表達後，ADR+shRNA-TRPC6組的ILK、Fn和MMP表達明顯下降（P＜0.05），ZO-1表達上升，通過鈣離子拮抗劑SKF96365抑制鈣離子活性劑TRPC6表達後，與ADR組相比，ADR+SKF96365組中ILK、Fn和MMP9表達明顯下降（P＜0.05），ILK活性明顯增強。3、與正常對照組相比，ADR腎病大鼠模型（4周）組腎皮質中TRPC6、ILK、Fn和MMP的表達明顯增加（P＜0.05），ADR+SKF96365（60ng/kg）組同ADR（6.5mg/kg）組相比，TRPC6、ILK、Fn和MMP表達明顯下降（P＜0.05），24小時尿蛋白定量明顯減少。 本研究同時在多種腎臟疾病的腎穿刺標本中同時檢測了TRPC6和ILK的表達變化，證實它們共同參與了腎小球硬化的發生。利用體外實驗將TRPC6和ILK聯繫在一起，從表達和功能兩個層面證實表達上調的TRPC6通過其介導的鈣離子內流增加可能提高ILK的表達及活性，導致足細胞損傷，參與腎小球硬化。為豐富對足細胞損傷分子機制的理解，如何抑制足細胞損傷，保持足細胞功能提供了潛在靶點。同時在大鼠模型中證實了小分子鈣離子抑制劑SKF96365可有效減少蛋白尿，為以TRPC6為靶點治療蛋白尿提供了理論基礎。
