《蛋白尿時腎小球足細胞重塑的作用分子及分子機制研究》是丁潔為項目負責人，北京大學為依託單位的重點項目。
基本介紹
- 中文名：蛋白尿時腎小球足細胞重塑的作用分子及分子機制研究
- 項目類別：重點項目
- 項目負責人：丁潔
- 依託單位：北京大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
蛋白尿見於多種兒童腎臟疾病，是進展至腎衰竭的獨立危險因素，蛋白尿的發生主要因腎小球足細胞足突和裂孔隔膜消失。但臨床和實驗研究均表明隨著蛋白尿好轉足細胞足突以及裂孔隔膜可再次出現，我們稱之為足細胞重塑，但分子機制不清。我們前期研究充分顯示裂孔隔膜分子nephrin、podocin和CD2AP以及新近確定的離子通道分子TRPC6對維繫裂孔隔膜結構和功能至關重要，同時還顯示骨架蛋白對裂孔隔膜分子有直接作用。本研究擬通過體內外實驗，以足細胞骨架蛋白為切入點，利用基因晶片和蛋白質組學技術確定參與足細胞重塑的主要骨架蛋白，揭示骨架蛋白與裂孔隔膜分子、離子通道蛋白TRPC6的分子間反應；以PI3K/AKT和MAPK以及GPCR信號通路為切入點，研究足細胞重塑的信號分子機制以及與足細胞骨架蛋白作用的分子路徑。希望在確定防治蛋白尿的分子靶點以及闡明蛋白尿發生的分子機制方面取得突破性進展。
結題摘要
蛋白尿見於多種兒童腎臟疾病，是進展至腎衰竭的獨立危險因素，蛋白尿的發生主要因腎小球足細胞足突和裂孔隔膜消失。臨床和實驗研究均表明隨著蛋白尿好轉足細胞足突以及裂孔隔膜可再次出現，我們稱之為足細胞“重塑”，但分子機制不清。我們前期研究顯示裂孔隔膜分子nephrin、podocin和CD2AP以及新近確定的離子通道分子TRPC6對維繫裂孔隔膜結構和功能至關重要，同時還顯示骨架蛋白對裂孔隔膜分子有直接作用。足細胞足突構成的裂孔隔膜結構和功能的異常見於多種蛋白尿性腎疾病，而骨架結構是足細胞發揮正常功能的基礎。 本研究通過構建大鼠嘌呤黴素腎病模型，分別在模型第2,10,15天分離腎小球，進行基因晶片分析以篩選新的骨架蛋白。結果首次確立了5個足細胞骨架蛋白，並且在人蛋白尿性腎病中也檢測到其表達。上述骨架蛋白的發現，有助於解釋足細胞足突融合復又伸出的分子機制，為闡明蛋白尿發生的分子機制提供新的研究方向。進一步選定在晶片分析中表達變化最明顯的Tagln基因做其功能研究。Tagln基因編碼的蛋白為transgelin，正常少量表達於足細胞，病理狀態下表達增加。我們在體外培養的足細胞中過表達transgelin，可見足細胞損傷，nephrin表達下降，Smad信號通路活化，提示其致足細胞損傷作用可能與其活化Smad信號通路有關。這部分研究結果已發表在腎臟領域排位前5的雜誌Nephrol Dial Transplant上。 TRPC6 是維持足細胞結構和功能的重要分子，其活化介導鈣離子內流。在一些蛋白尿性腎病中可見TRPC6 表達上調，在小鼠過表達TRPC6可引起蛋白尿。我們實驗小組首次用膜片鉗技術在足細胞中觀察到過表達TRPC6後，鈣內流增加，同時RhoA信號通路活化，並調控骨架蛋白改變。結果提示足細胞過表達TRPC6可活化RhoA信號通路，並介導足細胞骨架蛋白調控。這部分研究結果已經發表在Exp Biol Med。環保素A（CSA）是臨床治療激素依賴或激素耐藥性腎病綜合徵患兒的常用藥物，其作用機制目前還未完全明確。本研究首次探討CSA是否通過調節transgelin及另一骨架蛋白分子cofilin-1而發揮治療作用。這部分研究正在進行中，估計再需要大約半年時間可以獲得更確定的結果和結論。 本課題的研究將為蛋白尿的發生機制提供新的認識，並
