TRB3調控內質網應激對腸外營養相關肝損害影響機制研究

《TRB3調控內質網應激對腸外營養相關肝損害影響機制研究》是依託上海交通大學，由王瑩擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：TRB3調控內質網應激對腸外營養相關肝損害影響機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：王瑩
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

肝損害是腸外營養（PN）常見的併發症，目前病因未明，臨床防治仍是難題。我們課題組前期的研究發現，PN可導致肝細胞凋亡顯著增加。近年來，研究發現內質網應激（ERS）是引起細胞凋亡的重要途徑。內質網應激及其誘導的凋亡是否與PN相關肝損害有關，目前尚未見報導。TRB3是內質網應激的關鍵分子，在誘導細胞凋亡過程中起著重要作用，但其發揮作用的具體機制尚不清楚。本研究通過RT-PCR、Western blot及siRNA等技術，研究內質網應激對肝細胞凋亡的影響，以及TRB3通過何種機理誘導肝細胞凋亡。並在體外研究基礎上，建立斷乳期SD大鼠肝損害模型，檢測內質網應激相關基因表達，了解腸外營養相關肝損害發生機制、TRB3對腸外營養相關肝損害細胞凋亡的具體機理和信號途徑，期望在分子水平進一步闡明PN相關膽汁淤積及肝損害的機制，並為該併發症的防治提供可能的分子靶點。

結題摘要

背景：腸外營養相關肝損害（Parenteral nutrition-associated liver disease，PNALD）是長期腸外營養（Parenteral nutrition，PN）的主要併發症之一。目前認為，肝細胞凋亡參與了PNALD的發病機制。Tribbles同源蛋白3（Tribbles homolog 3，TRB3）是一種假激酶，調控多種信號級聯反應，與細胞凋亡的分子機制密切相關。 目的：在脂質誘導體外肝細胞損傷模型中深入研究TRB3調控細胞凋亡的信號通路；並擬通過建立幼年大鼠PNALD模型，在體內水平初步探討TRB3是否可能參與PNALD的分子機制。 方法：採用飽和脂肪酸棕櫚酸鈉構建肝細胞脂質損傷模型，檢測L02細胞凋亡、ATF4/CHOP通路和TRB3表達水平變化。通過瞬時轉染外源性過表達TRB3及免疫共沉澱的方法進一步研究TRB3調控L02細胞凋亡的通路。在動物模型中，3周齡Sprague-Dawley雄性大鼠隨機分成2組，包括PN組與對照組，7天后取血樣和肝組織標本，評估血清肝功能指標、病理學變化，並檢測肝組織表達TRB3、ATF4、CHOP mRNA和蛋白水平。 結果：在脂質誘導體外肝細胞損傷模型中，棕櫚酸鈉誘導L02細胞細胞凋亡，伴隨ATF4、CHOP、TRB3 mRNA和蛋白表達水平增高；外源性TRB3過表達進一步加重了棕櫚酸鈉對細胞的促凋亡作用；免疫共沉澱提示TRB3與Akt蛋白存在相互作用。在PNALD動物模型中，PN組體重增長速率低於對照組（平均日增長2.15±0.94 vs 6.35±0.56 g；P=0.000）；PN組大鼠血清直接膽紅素水平明顯高於對照組（2.54±1.06 vs 0.91±0.58μmol/L, P=0.004）。肝組織病理檢查提示PN組出現肝細胞脂肪變性、點狀壞死、灶性炎細胞聚集。對照組基本正常，偶有炎細胞浸潤。與對照組相比較，PN可誘導幼年大鼠肝組織TRB3 mRNA（1.06 ± 0.35 vs 3.02 ± 1.99；P = 0.025）和蛋白水平表達增高，伴隨肝細胞凋亡增加。 結論：通過構建脂質誘導肝細胞損傷模型，揭示TRB3通過Akt磷酸化通路調控棕櫚酸鈉誘導肝細胞凋亡；幼年SD大鼠PNALD模型研究初步表明TRB3很可能參與了PNALD的發病機制。