《TLR4與H9N2禽流感病毒誘導小鼠急性肺損傷的關係研究》是依託中國農業大學，由喬健擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：TLR4與H9N2禽流感病毒誘導小鼠急性肺損傷的關係研究
- 依託單位：中國農業大學
- 項目負責人：喬健
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
有關病毒與細胞相互作用，特別是固有免疫應答與病毒致病性的研究，是細胞生物學的前沿領域。本項目從細胞和整體水平探討Toll樣受體4（TLR4）介導的固有免疫應答與H9N2-AIV誘導小鼠急性肺損傷（ALI）之間的關係。用滅活病毒粒子分別處理TLR4基因突變和野生型小鼠的肺巨噬細胞，觀察TLR4信號通路的時空轉換，從細胞水平初步揭示H9N2-AIV是否啟動了TLR4介導的固有免疫應答。用H9N2-AIV活病毒感染小鼠，動態觀察並比較不同基因型小鼠的發病過程，及靶器官TLR4-NF-κB信號通路活性的改變，揭示TLR4介導的固有免疫應答與H9N2-AIV誘導的小鼠ALI之間的關係。用滅活病毒粒子處理小鼠，比較不同基因型小鼠的病理反應，進一步解讀TLR4介導的固有免疫應答與病毒PAMPs之間的識別關係。本項目不但可加深對動物流感病理生物學的認識，同時對充實固有免疫應答理論具有普遍的科學意義。
結題摘要
有關病毒與細胞相互作用，特別是固有免疫應答與病毒致病性的研究，是細胞生物學的前沿領域。本項目從細胞和整體水平探討Toll樣受體4（TLR4）介導的固有免疫應答與H9N2-AIV誘導小鼠急性肺損傷（ALI）之間的關係。用滅活病毒粒子分別處理TLR4基因突變和野生型小鼠的肺巨噬細胞，觀察TLR4信號通路的時空轉換，從細胞水平初步揭示H9N2-AIV是否啟動了TLR4介導的固有免疫應答。用H9N2-AIV活病毒感染小鼠，動態觀察並比較不同基因型小鼠的發病過程，及靶器官TLR4-NF-κB信號通路活性的改變，揭示TLR4介導的固有免疫應答與H9N2-AIV誘導的小鼠ALI之間的關係。用滅活病毒粒子處理小鼠，比較不同基因型小鼠的病理反應，進一步解讀TLR4介導的固有免疫應答與病毒PAMPs之間的識別關係。本項目不但可加深對動物流感病理生物學的認識，同時對充實固有免疫應答理論具有普遍的科學意義。我們：按計畫要點完成本項目：內容包括（1）小鼠肺泡巨噬細胞的培養：從支氣管肺泡灌洗液（BALF）獲取肺泡巨噬細胞進行培養；（2）在細胞系統觀察 H9N2-AIV是否啟動了TLR4介導的固有免疫應答：前期研究發現Hebei/2008/4（H9N2）簡稱HB/4（H9N2）對小鼠有強致病性。為闡明其致病機理，本研究首先將HB/4（H9N2）雞胚毒經MDCK細胞傳代製備細胞毒並用蝕斑試驗評價其細胞毒力；然後給清潔級昆明小鼠頸部皮下連續5d注射內毒素（1μg/g/d體重），製備內毒素耐受小鼠；最後用HB/4（H9N2）細胞活毒和滅活毒分別感染耐受小鼠和對照小鼠腹腔巨噬細胞，用免疫放射法比較感染後12h、18h培養細胞上清液中IL-6和IL-1β含量；觀察HB/4（H9N2）對內毒素耐受小鼠腹腔巨噬細胞炎性因子的誘導作用。（3） 觀察TLR4是否介導了H9N2-AIV誘發的小鼠ALI：用H9N2-AIV活病毒分別鼻腔感染TLR4基因突變型和野生型小鼠，動態觀察並比較病毒感染不同基因型小鼠的發病（急性肺損傷）過程，病毒在靶器官中的增殖曲線以及靶器官TLR4-NF-κB信號通路活性的時空轉換。根據試驗結果，綜合分析基因突變型和野生型小鼠對H9N2-AIV的易感性是否存在差異，基因突變型小鼠的發病率和急性肺損傷比野生型小鼠輕，推斷TLR4介導了H9N2-AIV誘發的小鼠ALI。
