《MIF在H9N2禽流感病毒誘導急性肺損傷中的作用及機制研究》是依託華東師範大學，由何桂梅擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：MIF在H9N2禽流感病毒誘導急性肺損傷中的作用及機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：何桂梅
- 依託單位：華東師範大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
急性肺損傷（ALI）是臨床常見的呼吸系統急危重症，病死率高，發病機制複雜，肺內過度失控的炎性反應是其主要病因之一。巨噬細胞移動抑制因子（MIF）作為固有免疫中樞的關鍵調節因子，在肺損傷的炎症反應中可能發揮著非常重要的作用。H9N2流感病毒感染宿主廣泛且易與其他亞型的流感病毒發生基因重組，WHO將其列為流感大流行的潛在病毒。H9N2流感病毒感染宿主可以誘導明顯的肺損傷症狀，但MIF在其中發揮的作用及作用機制目前未見報導。基於此，本項目擬藉助MIF-/-基因缺失小鼠，分別從細胞及體內水平，運用實時螢光定量PCR、蛋白印跡、ELISA、免疫組化及轉錄組測序等方法，觀察相關炎性基因與細胞時空變化，探討MIF在H9N2禽流感病毒誘導急性肺損傷發病過程中的作用及其作用機制，為流感病毒誘發肺損傷發病機理、MIF介導的固有免疫應答及相關學科的發展提供參考，也期望能為ALI臨床治療藥物提供研究靶標。
結題摘要
急性肺損傷是一種急性的、持續性的肺部炎症反應綜合徵。H9N2亞型的禽流感病毒雖然是低致病性禽流感病毒，但其呈地方流行性且可突破中間屏障直接感染人，並能引起急性肺損傷。巨噬細胞移動抑制因子(MIF) 被認為是一種促炎細胞因子，是炎症反應和免疫反應的重要調節劑，它參與了一些疾病的發生和發展，如敗血症、關節炎、糖尿病和肺部損傷等。目前對於MIF在H9N2禽流感病毒誘導的炎症或免疫反應中是否發揮作用以及具體的作用機制尚未有報導。 本項目首先通過構建慢病毒包被的MIF-shRNA重組質粒載體，藉助shRNA干擾技術沉默A549細胞MIF基因表達，來探討了MIF在H9N2禽流感病毒誘導炎性反應中的作用。其次，藉助實時螢光定量RT-PCR技術檢測MIF的表達受到干擾後對相關細胞因子表達的影響，以及用轉錄組測序技術來探討MIF在H9N2誘導的炎症中可能參與的信號通路和作用機制。最後，又對MIF特異性抑制劑ISO-1對MIF的表達干擾作用進行了進一步的研究。結果表明：（1）慢病毒介導的MIF-shRNA轉染A549細胞後可顯著干擾MIF基因的表達，達到了抑制目的基因MIF表達的目的；（2）在體外，MIF-shRNA對於H9N2誘導的細胞過度炎症因子（如IL-6, TNF-α, IFN-α/IFN-β和 NF-κB等）以及趨化因子具有明顯的抑制作用；（3）轉錄組分析表明MIF參與多條細胞內外的信號通路，如TLR天然免疫信號通路，MAPK/ERK1/ERK2/NF-κB信號通路等，並在各信號通路互聯互作形成的複雜信號網路中扮演者重要的“承前啟後”的作用；（4）MIF特異性互變異構酶抑制劑ISO-1可以在細胞水平上較為顯著抑制MIF的基因表達，並間接影響相關細胞因子的表達水平。截至目前共有2篇SCI文章發表，另有兩篇關於MIF抑制劑ISO-1及其機制的文章正在審稿或撰寫階段，預計明年可見刊。 總之，通過本項目的研究，我們分別從干擾MIF表達及MIF抑制劑兩方面均證實了MIF確實對H9N2禽流感病毒誘導的炎性反應具有明顯的抑制作用。因此，MIF有可能成為禽流感病毒誘導急性肺損傷的新藥靶點，為進一步探索其治療提供新思路和新模式。
