TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）把PCR片段與一個具有3‘-T突出的載體DNA連線起來的方法。
基本介紹
- 中文名：T-A克隆
- 外文名：Original TA Cloning Kit
- 學科：生物化學與分子生物學
- 特點：聚合酶
TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）把PCR片段與一個具有3‘-T突出的載體DNA連線起來的方法。因為PCR反應中所使用的聚合酶具有末端轉移的活性，通常在3'加上A。例如：Taq聚合酶同時具有的末端連線酶的功能，PCR反應時在每條PCR擴增產物的3`端自動添加一個3`-A突出端。只有用經過特殊處理的具有3’-T突出末端的DNA片段才能通過T/A配對進行連線。 通過PCR的方法擴增目的基因片段的過程中，由於往往不清楚目的基因的DNA序列，獲得的目的片段通常需要通過TA克隆的方法，重組到T-載體中，通過序列測定清楚DNA序列。由於在PCR過程中，使用的DNA聚合酶不同，往往分為2種情況：（1）使用不同的Taq酶，在PCR擴增循環結束後，加上72℃ 10分鐘一個過程，Taq酶可以在擴增產物的3末端加上A，因此PCR產物回收純化後可以和T載體直接連線。（2）使用高保真的DNA聚合酶，如pfu酶，由於其不能在擴增產物的3末端加上A，得到的DNA序列為鈍端，因此，需要在回收純化後進行加A的過程，通常是以PCR回收產物為模板，加上一定量的普通Taq酶和反應液，加入dATP（或dNTP）， 72℃ 10分鐘，然後將加A產物直接用於TA連線。
The complementarity between the vector 3'-T overhangs and PCR product 3'-A overhangs allows direct ligation of Taq-amplified PCR products into the T-vector, and this strategy is commonly referred to as “TA cloning.”
