全稱為：羥丙基葡聚糖凝膠。常用商品凝膠的一種（另一種為交聯葡聚糖凝膠Sephadex G)。Sephadex LH-20為Sephadex G-25（葡聚糖凝膠按交聯度分類的其中一種商品型號）經羥丙基化處理後得到的產物，此時，葡聚糖凝膠分子中的葡萄糖部分將與羥丙基結合成下列醚鍵形式： -OH → -OCH2CH2CH2OH
基本介紹
- 中文名：羥丙基葡聚糖凝膠
- 外文名：Sephadex LH-20
- 產品類型：常用商品凝膠
- 來源：經羥丙基化處理後得到的產物
簡介,原理,洗脫溶劑,處理選擇,分離技巧,
簡介
全稱為：羥丙基葡聚糖凝膠。常用商品凝膠的一種（另一種為交聯葡聚糖凝膠Sephadex G)。Sephadex LH-20為Sephadex G-25（葡聚糖凝膠按交聯度分類的其中一種商品型號）經羥丙基化處理後得到的產物，此時，葡聚糖凝膠分子中的葡萄糖部分將與羥丙基結合成下列醚鍵形式： -OH → -OCH2CH2CH2OH
與Sephadex G比較，Sephadex LH-20分子中 -OH 基總數雖無改變，但碳原子數所占比例卻相對增加了，所以Sephadex LH-20不僅可在水中套用，也可在極性有機溶劑或他們與水組成的混合溶劑中膨潤使用。
Sephadex LH20是一種價錢較高的填料，特點： 1、適合用有機溶劑分離嗜脂性分子，可以非常經濟地大規模製備各種天然產物 2、結合凝膠過濾、分配色譜及吸附性層析於一身，分離結構非常相近的分子 3、載量可高達300mg樣品/ml凝膠，極少需要再生，分離效果可保持十幾年不變。
原理
Sephadex LH20的分離原理是根據分子大小，主要有兩方面：以凝膠過濾作用為主，兼具反相分配的作用（在反相溶劑中）。因為凝膠過濾作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脫下來，小分子的化合物保留強，最後出柱（具體原理可參見分子篩層析）。如果使用反相溶劑洗脫， Sephadex LH20對化合物還起反相分配的作用，所以極性大的化合物保留弱，先被洗脫下來，極性小的化合物保留強，後出柱。如果使用正相溶劑洗脫，這主要靠凝膠過濾作用來分離。
洗脫溶劑
Sephadex LH20 洗脫溶劑因分為兩類：反相和正相兩種。用得最多的是反相溶劑洗脫，以甲醇/水系統最為常見，先用水，逐漸增加甲醇比例，最後用100%甲醇沖柱。正相系統以氯仿/甲醇最為常見，先用50%氯仿/甲醇，逐漸增加甲醇比例，最後用100%甲醇沖柱。
處理選擇
如果樣品極性大，就選用反相溶劑洗脫（甲醇/水），樣品用最少體積的甲醇/水（儘可能甲醇少一些）溶解，過濾後，濕法上樣。如果樣品極性小，這選用正相溶劑洗脫（氯仿/甲醇），樣品用最少體積的氯仿/甲醇溶解，過濾後，濕法上樣。
分離技巧
（1） 分離時流速不可太快，切切不可心急，所謂欲速則不達；接餾分時可開全速，節省時間。
（2）柱子儘可能長， Sephadex LH20 柱長的增加將極大地改善分離，所不要吝惜填料，寧可將填料全裝在一根大柱子中，不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優勢兵力，打擊敵人。
（3） 餾分一定要接的細，可1/10，或1/20 個保留體積接成一餾分。
（4） 洗脫體積一般為2-3個保留體積，對特殊保留強的化合物，可洗脫5個保留體積。
（5）鞣質成分死吸附嚴重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣質
（6）Sephadex LH20 對黃酮類成分的分離效果極佳，方法很成型，有大量文獻參考。
（7）填料反覆使用，每次用完，一般可用甲醇將柱子洗乾淨，然後用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來，待用。暫時不用試可以水洗→含水醇洗（醇的濃度逐步遞增）→醇洗，最後泡在醇中貯於磨口瓶中備用。如長期不用時，可在以上處理基礎上，減壓抽乾，再用少量乙醚洗淨抽乾，室溫充分揮散至無醚味後，60～80°C乾燥後保存。
