Sanger法

Sanger法即雙脫氧末端終用做止法，測定DNA一級結構

基本介紹

• 中文名：雙脫氧末端終用做止法
• 外文名：Sanger法
• 方法：分成四組分別為ddATP、ddGTP等
• 用途：測定DNA一級結構

雙脫氧末端終用做止法，測定DNA一級結構

原理是採用核苷酸鏈終止劑—2，，3，-雙脫氧核苷酸終止DNA的延長。由於它缺少形成3/5/磷酸二脂鍵所需要的3-OH，一旦參入到DNA鏈中，此DNA鏈就不能進一步延長。根據鹼基配對原則，每當DNA聚合酶需要dNMP參入到正常延長的DNA鏈中時，就有兩種可能性，一是參入ddNTP,結果導致脫氧核苷酸鏈延長的終止；二是參入dNTP,使DNA鏈仍可繼續延長，直至參入下一個ddNTP。根據這一方法，就可得到一組以ddNTP結尾的長短不一的DNA片段。

方法是分成四組分別為ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP反應後，聚丙烯醯胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。