染色試驗（Sabin—Feldman dye tese，DT）。 是弓形蟲特有的血清學診斷法，此法特異性高而且被認為是標準的診斷方法。
基本介紹
- 中文名：Sabin-Feldman染色試驗
- 外文名：Sabin—Feldman dye tese
- 作用：弓形蟲特有的血清學診斷法
- 特點 ：特異性高
原理,輔助因子,抗原製備,美藍染液,待檢血清,檢測,結果判定,
原理
是活的弓形蟲速殖子與正常血清混合，在37℃作用1h或室溫數小時後，大部分滋養體由原來的新月形變為圓形或橢圓形，細胞質對鹼性美藍具有較強的親和力而被深染。但當弓形蟲與含特異性抗體和補體(輔助因子accessoryfactor.AF)的血清混合時，蟲體受到抗體和補體的協同作用而變性，對鹼性美藍不著色。計算著色與不著色蟲體比例即可判斷結果。
輔助因子
存在於正常人新鮮血清內，不耐熱。用作輔助因子的血清需預先篩選，即將候選血清與弓形蟲速殖子混合，37℃作用1h後，有90%以上蟲體經美藍染色後，著色者即含有輔助因子（AF）。含輔助因子血清可分裝後於一2O℃保存備用。
抗原製備
弓形蟲速殖子經腹腔感染小鼠，3d後抽取腹腔液，生理鹽水洗滌3次(300Or/min×lOmin)，收集純淨蟲體。也可將小鼠腹腔懸液用胰酶消化，經G3砂蕊漏斗或纖維素濾膜過濾純化，所獲蟲體用輔助因子血清稀釋至每高倍視野50個左右蟲體，即為抗原液。
美藍染液
美藍10g加入95%乙醇溶液1OOml，濾紙過濾，取3ml加pHll的鹼性緩衝液（O.53%Na2CO39.73ml，1.91%Na2B4O70.27ml）lOml。鹼性緩衝液臨用前配製。
待檢血清
新鮮血清需經56℃30min滅活，或直接用生理鹽水倍比稀釋後，每管0.lm1,4℃中次日使用。
5.
檢測
在稀釋血清內每管加上述抗原懸液0.lml，37℃孵育1h，滴加美藍染液0.O2ml/管，繼續溫育l5min後，自每管取懸液1滴塗片，加蓋玻片鏡檢。
結果判定
計算各管不著色蟲體的百分比，以50%蟲體不著色管的血清稀釋度為該份被檢血清的最高抗體滴度。一般認為，抗體滴度1:8為隱性感染;1:956為活動性感染;1:1024以上為急性感染。
DT所測抗體是蟲體表膜抗原誘導的特異性抗體。本試驗易與肉孢子蟲抗血清發生交叉反應；操作中需用活蟲；輔助因子血清篩選較煩瑣。
