《RhoA/JNK信號通路調控牙乳頭分化的機制研究》是依託四川大學，由汪成林擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：RhoA/JNK信號通路調控牙乳頭分化的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：汪成林
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
牙發育的分子機制一直是牙發育生物學的研究熱點和難點。牙乳頭在牙發育中起重要作用，是決定牙形狀的重要因素，牙乳頭細胞向基底膜遷移並形成極性是分化為成牙本質細胞的必要過程。RhoA/JNK通路參與調控牙乳頭細胞的粘附遷移能力和極性形成，並對成牙本質細胞的形成及牙本質形成起著重要的作用，且Rac1參與此通路的調控，有關此方面的研究目前國內外尚未見報導。為證實推測，我們通過慢病毒轉染技術和顯微分離技術將構建的RhoA突變體，Rac1突變體慢病毒轉入牙乳頭組織，結合JNK基因敲除小鼠的動物模型，充分研究了RhoA/JNK信號通路在牙乳頭髮育過程中的作用與機制及Rac1調控此通路的機制，為牙發育生物學理論添磚加瓦，為牙組織工程及牙髓修復理論奠定基礎。
結題摘要
牙發育的分子機制一直是牙發育生物學的研究熱點和難點。牙乳頭在牙發育中起重要作用，是決定牙形狀的重要因素，牙乳頭細胞向基底膜遷移並形成極性是分化為成牙本質細胞的必要過程。RhoA/JNK通路參與調控牙乳頭細胞的粘附遷移能力和極性形成，並對成牙本質細胞的形成及牙本質形成起著重要的作用，有關此方面的研究目前國內外尚未見報導。本課題的主要目的是揭示JNK信號在牙乳頭髮育過程中的作用和調控機制。 將獲得的牙乳頭細胞於膠原中進行三維培養，與牙上皮細胞一起構建三維培養模型，結果發現牙乳頭細胞可以誘導牙上皮細胞分化，且能獲得基底膜的有效成分分泌。提示體外培養的牙乳頭細胞，有進一步誘導牙上皮形成的能力。該模型經過最佳化培養條件，或許能為牙胚發育的體外細胞培養模型提供參考。 實驗發現Wnt5a重組蛋白和Wnt5a條件培養基對人牙髓細胞的生物學作用基本一致，且Wnt6條件培養基和Wnt3a重組蛋白均可套用於人牙髓細胞的進一步研究。該部分結果提示，研究Wnt信號通路時，Wnt重組蛋白和Wnt條件培養基的作用基本一致，兩種過表達的方式均可套用於實驗研究。 本課題首次檢測了JNK信號通路在牙乳頭髮育過程中的表達，發現P-JNK主要表達於分化中和分化後的成牙本質細胞中。同時，JNK信號通路對牙乳頭細胞的生物學行為有明顯影響，抑制JNK信號通路後，牙乳頭細胞的遷移、分化功能受到抑制。結果還提示JNK信號通路在牙乳頭髮育過程中可能參與了調節細胞外基質分泌及降解過程，從而影響牙乳頭細胞的功能，提出了新的研究方向。 除此之外，本課題還首次發現Timp2基因表達與JNK信號通路有互動作用，且發現Timp2敲除後小鼠的P-JNK信號減弱明顯，MMP2、MMP9表達減弱明顯，提示Timp2可能是JNK信號通路的下游調控因子，且JNK信號通路的激活或許對於牙乳頭細胞分化和基質形成與礦化更有關係。
