Red/ET重組

Red/ET重組是一種基於λ噬菌體Red操縱子（Redα/Redβ/Redγ）和Rac噬菌體RecE/RecT系統介導的DNA同源重組技術。

技術簡介

Red/ET重組是新近出現的一種基於λ噬菌體Red操縱子（Redα/Redβ/Redγ）和Rac噬菌體RecE/RecT重組系統的DNA工程技術。

通過該技術可以簡單、快速地對任意大的DNA分子進行插入、敲除、突變等多種修飾，而且還可對長達80kb的DNA片段進行亞克隆。由於重組反應的整個過程都是在大腸桿菌細胞內部完成，因此不存在鹼基突變危險。該技術已被廣泛地用於基因組DNA，如細菌人工染色體、大腸桿菌染色體等的遺傳修飾研究以及基因工程藥物的研究和開發中。

操作流程

Red/ET技術流程圖

Red/ET技術流程圖

技術主要套用

重組質粒構建

Red/ET重組中質粒修飾的四種策略

Red/ET重組中質粒修飾的四種策略

細菌人工染色體的快速修飾

傳統基因工程技術（A）和Red/ET重組技術（B）修飾E.coli染色體實驗步驟比較

實驗步驟比較

長片段基因克隆及亞克隆

構建各種人類疾病的動物模型

生物工程藥物的研製

基因打靶載體的構建

優點

1. 所需同源序列短：～45bp；
   
2. 突變率低；
   
3. 不受限制性核酸內切酶位點限制；
   
4. 無DNA大小限制；
   
5. 高效。
   

展望

基因組測序工程的實施與完成將越來越多的基因序列信息展現在人們面前，進一步明確這些已知或未知基因的功能是後基因組時代的一個重要研究內容。基因打靶小鼠模型是開展基因功能研究的一個非常有效途徑,而其實施基礎則是首先構建出相應的基因打靶載體。目前，基因打靶載體的構建主要依賴於酶切和PCR擴增技術。一般情況下，都是先通過酶切或PCR方法獲得長、短臂基因組同源區,然後再分別與篩選標記基因和打靶質粒骨架進行多次連線、轉化。除了操作相對繁瑣外，由於大部分實驗是在體外實施，操作過程中還具有鹼基突變和缺失的危險，因此所構建的基因打靶載體往往需要進行測序驗證。所以，用這種方法構建基因打靶載體相對費時費力。

科學家將Red/ET重組技術成功地引入到基因打靶載體構建之中。利用其可對長DNA片段進行亞克隆，不存在鹼基突變危險的特點，建立了一種快速、高效的打靶載體構建方法。運用該方法進行基因打靶載體不僅省時、省力，而且高效、安全。此技術方法的建立為加速後基因組時代基因功能的研究提供了一條捷徑。