Prmt5在魚類胚胎和生殖細胞發育中的作用機理研究

《Prmt5在魚類胚胎和生殖細胞發育中的作用機理研究》是依託華中師範大學，由趙浩斌擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：Prmt5在魚類胚胎和生殖細胞發育中的作用機理研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：趙浩斌
• 依託單位：華中師範大學

項目摘要

Prmt5是蛋白質精氨酸甲基化酶，在多種生物功能如RNA剪下、肌肉發生、細胞凋亡、哺乳動物幹細胞維持和生殖細胞發生等過程中發揮重要作用。魚類Prmt5在其胚胎及生殖細胞發育中的功能研究鮮有報導。本研究以青鱂為模式對象,套用蛋白組學方法,研究胚胎髮育關鍵階段和性腺的蛋白質甲基化狀況。通過基因敲降和過量表達，觀察Prmt5對胚胎髮育、生殖細胞發生的作用以及Prmt5對細胞增殖和凋亡的影響，並通過轉錄組分析了解Prmt5對胚胎基因表達的影響。採用酵母雙雜交和BiFC、免疫共沉澱等方法研究與Prmt5相互作用的其它蛋白質。對一些生殖細胞和幹細胞特異基因通過原位雜交、定量RT-PCR等方法做進一步研究。項目的完成將對Prmt5在魚類胚胎髮育和生殖細胞發生的作用有比較全面而深入的了解，更深刻地了解甲基化在魚類發育中的調控作用。本項目的研究成果對水產養殖魚類生殖繁育甚至幹細胞培育都具有參考作用。

結題摘要

本項目的研究目標是以青鱂為模式動物，了解Prmt5在魚類胚胎髮育、生殖細胞形成過程中的作用。本項目基本按照既定研究計畫執行。採用TALEN基因編輯技術，獲得Prmt5及Mep50基因突變體，正在進行純合子篩選和後續的研究工作。採用酵母雙雜交技術，本項目獲得了與Prmt5相互作用的蛋白質，並對部分蛋白如Prdm1、Mep50等在青鱂發育和免疫等方面的作用進行了研究。Mep50 是Prmt5的伴侶蛋白，其表達模式和Prmt5一致。研究發現了Mep50與Prmt5相互作用的關鍵位點，進行了Prmt5和Mep50的體外表達。Prdm1有兩個同源基因Prdm1a和Prdm1b，它們都能與Prmt5相互作用，在多種組織中有表達。Prmd1a在青鱂和斑馬魚先天免疫中也有作用。進行了雄性生殖幹細胞相關基因Plzf以及與Prdm1相互調控的Bcl6的研究。而原定的蛋白組學和轉錄組學分析尚待後續研究。本項目已經發表相關研究論文7篇（包括5篇SCI論文），參加國內和國際學術會議多次，培養畢業碩士研究生5名。經費約有17萬元結餘，將用於後續研究。