《PLGA/PEI納米微泡聯合UTMD介導shRNA轉染治療缺血性心肌病的研究》是依託華中科技大學，由謝明星擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：PLGA/PEI納米微泡聯合UTMD介導shRNA轉染治療缺血性心肌病的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：謝明星
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
超聲介導基因轉染是治療缺血性心肌病(IHD)的研究熱點之一，其存在的主要問題是研製出既能結合質粒DNA又能保護質粒DNA，不易被DNA酶降解，且生物相容性好的造影劑。本研究基於IHD血管生成基因治療理論，製備聚乳酸聚乙醇酸共聚物（PLGA）/聚乙烯亞胺（PEI）納米微泡，包載靶向脯氨醯羥化酶域-2短髮卡狀RNA干擾質粒（PHD2-shRNA），運用超聲靶向微泡破壞（UTMD）轉染方法結合RNA干擾技術，將PLGA/PEI納米微泡介導PHD2-shRNA干擾質粒轉染至缺血心肌。研究中最佳化不同UTMD參數，評價其對不同報告基因體內、外轉染靶向性及有效性的影響。建立大鼠IHD模型，探討UTMD聯合PLGA/PEI納米微泡介導PHD2-shRNA轉染對促進缺血心肌內血管新生的作用，並觀察其對心功能改善情況，以期為IHD的基因治療提供一種安全、有效的方法。
結題摘要
目的：採用超聲靶向微泡破壞(UTMD)聯合RNA干擾技術促進PHD2-shRNA轉染心肌細胞(H9C2)的可行性及大鼠急性心肌梗塞(MI)的治療效果。方法：體外研究：體外常氧、缺氧培養H9C2心肌細胞，分為4組(1)對照常氧組(shScramble常氧組)；(2) PHD2-shRNA常氧組；(3)對照缺氧組(shScramble缺氧組)；(4) PHD2-shRNA缺氧組。UTMD聯合PEI介導PHD2-shRNA和對照質粒分別對上述各組進行轉染。體內研究：建立大鼠急性MI動物模型，隨機分為：假手術組(sham)、MI對照質粒組(shScramble組)、PHD2-shRNA干擾質粒(shPHD2組)檢測PHD2、HIF1a mRNA等促血管生成因子蛋白水平表達情況。結果: ①體外研究：PHD2-shRNA常氧和缺氧組HIF-1α蛋白條帶亮度明顯高於相對應對照質粒常氧和缺氧組。對照常氧組、PHD2-shRNA常氧組、對照缺氧組和PHD2-shRNA缺氧組PHD2/GAPDH吸光度比值、HIF-1α/GAPDH吸光度比值兩兩間比較差異具有統計學意義。RT-PCR分析顯示PHD2-shRNA常氧和缺氧組VEGF、TGF-β和bFGF mRNA條帶亮度明顯高於相對應對照質粒常氧和缺氧組，各組之間不同指標兩兩比較差異具有統計學意義。②體內研究：shPHD2組較shScramble組心功能明顯改善；與shScramble組比較，shPHD2組第7d、14d及28d所測LVEF、LVFS值均增加；shPHD2組內HIF-1α、VEGF均較shSchamble組表達增加，於第14d達峰值，與shSchamble組比較，shPHD2組內可見更多新生血管形成，二組比較，差異有統計學意義。結論：UTMD可促進PHD2-shRNA轉染至大鼠心肌組織；靶向PHD2基因的shRNA干擾質粒可有效促血管生成因子表達，促進缺血心肌內新生血管形成，有效改善大鼠心功能。
