《PGC-1α調控視網膜新生血管形成的研究》是依託中南大學，由蔣劍擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：PGC-1α調控視網膜新生血管形成的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：蔣劍
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
視網膜新生血管可導致嚴重的致盲性眼病，一直是眼科界的研究重點。最新研究發現過氧化物酶增殖激活受體-γ共激活子-1α（PGC-1α）能上調包括VEGF在內的血管生成因子的表達，促進新生血管形成，而且PGC-1α對VEGF的調控作用要強於HIF-1α。我們前期研究證實PGC-1α在視網膜有表達，並且受缺氧的正調控。在此基礎上，本項目將首先在HUVEC中檢測PGC-1α的表達變化；轉染重組PGC-1α和PGC-1α siRNA證實PGC-1α對VEGF的調控作用，並觀察其對HUVEC體外管腔形成的影響。然後建立氧誘導的視網膜新生血管小鼠模型，檢測PGC-1α在視網膜中的表達定位；玻璃體腔注射重組PGC-1α和PGC-1α siRNA，檢測其對視網膜VEGF及視網膜新生血管形成的調控作用。本項目將闡明PGC-1α調控視網膜新生血管形成的分子機制，有望找到新的基因治療靶點及更有效的基因治療方法。
結題摘要
視網膜新生血管可導致嚴重的致盲性眼病，一直是眼科界的研究重點。本項目為了探討PGC-1α對視網膜新生血管形成的調控作用，從體外和體內實驗兩方面展開了研究。 體外實驗中，我們將人臍靜脈血管內皮細胞（HUVEC）分成常氧（20%）組和低氧（1%）組。細胞低氧培養3h，再恢復常氧培養3h、6h、24h。PGC-1α mRNA和蛋白的表達在低氧3h後明顯上調，恢復常氧培養3h、6h、24h後，表達逐漸下調。HUVEC轉染重組PGC-1α蛋白24h後，VEGF mRNA和蛋白的表達較對照組均上調。HUVEC轉染PGC-1α siRNA 24h後，再繼續於常氧和低氧環境下培養16h，PGC-1α、VEGF mRNA和蛋白的表達均被明顯抑制。HUVEC轉染重組PGC-1α蛋白48h後，將細胞轉移至Matrigel基底膜包被的培養板，繼續於常氧和低氧環境下培養48h，細胞管腔形成增多，而轉染PGC-1α siRNA後，細胞管腔形成減少。 體內實驗中，C57BL/ 6J小鼠在出艙後6小時（P12 6h），PGC-1α mRNA和蛋白表達開始上調，到P17達到高峰。玻璃體腔注射Cy3標記的PGC-1α siRNA後24小時檢測其在視網膜有表達。正常鼠和模型鼠在玻璃體腔注射重組PGC-1α後，血管生成均增加，VEGF的表達均增加，模型鼠更明顯。玻璃體腔注射PGC-1α siRNA， PGC-1α siRNA組較模型組和模型對照組新生血管叢明顯減少，螢光滲漏明顯 減輕；PGC-1α siRNA組較模型組和模型對照組突破視網膜內界膜的細胞核數量減少，差異均有統計學意義（P＜0.01）。視網膜PGC-1α mRNA及蛋白表達水平：模型組和模型對照組較正常組上調，而PGC-1α siRNA組較模型組下調，抑制效率分別為54%和53%，差異有統計學意義（P＜0.01）。VEGF mRNA及蛋白表達水平：模型組和模型對照組較正常組明顯上調，而PGC-1α siRNA組較模型組明顯下調，差異均有統計學意義（P＜0.01），抑制效率分別為48%和40%。PGC-1α和VEGF陽性表達主要位於視網膜神經節細胞層和核心層。模型對照組和模型組均為強陽性表達，而PGC-1α siRNA組的表達較模型組減弱。 本項目初步闡明了PGC-1α調控視網膜新生血管形成的分子機制，有望找到新的基因治療靶點。
